Takara iDimerize regulated transcription system

Takara iDimerize Regulated Transcription System

기술 개요

iDimerize 기술은 DNA 결합 도메인(DNA Binding Domain)과 전사 활성화 도메인(Transcription Activation Domain)의 화학적 이합체화를 통해 목표 유전자의 전사 활성화를 정밀하게 제어할 수 있습니다.
이 시스템의 주요 장점은 낮은 배경 신호(low background)이며, 이는 전사 활성화 도메인(AD)이 이합체화 리간드가 추가되기 전까지 물리적으로 DNA로부터 분리되어 있기 때문입니다.

작동 원리

전사 인자는 두 가지 기능을 가진 단백질로서,

• DNA 결합 도메인을 통해 특정 DNA 서열을 인식하고,
• 전사 활성화 도메인을 통해 세포의 전사 기구를 모집하여 전사를 활성화합니다.

이 두 도메인은 개별 단백질로 발현되더라도 A/C Heterodimerizer 리간드에 의해 결합되어 전사를 유도할 수 있습니다.

A/C Heterodimerizer Ligand (AP21967)

A/C Heterodimerizer는 합성된 세포 투과성 리간드로, 두 개의 융합 단백질 간 이합체화를 유도합니다.
예를 들어, 본 키트에서는 DmrC가 태그된 전사 활성화 도메인이 DmrA가 태그된 DNA 결합 도메인과 결합하도록 유도합니다.
이 리간드는 ARIAD Pharmaceuticals Inc.에서 이전에 공급하던 AP21967과 동일합니다.

전사 조절 방법

세포 내에서 다음 두 종류의 플라스미드를 순차적으로 형질감염(transfection)합니다.

1. 전사 활성화 및 DNA 결합 구성요소를 발현하는 플라스미드 (pHet-Act1-2)
2. 목표 유전자가 PZI-1 유도성 프로모터 하류에 클로닝된 플라스미드 (pZFHD1-2)

DNA 결합 구성요소는 항상 프로모터에 결합되어 있지만, DmrA 및 DmrC 도메인을 통해 전사 활성화 구성요소와 결합하기 전까지는 전사를 유도하지 않습니다.
A/C Heterodimerizer를 첨가하면 두 구성요소가 상호작용하여, 목표 유전자가 PZI-1 프로모터로부터 전사됩니다.

주요 특징 요약