Takara Guide-it Knockin Screening Kit

Takara Guide-it Knockin Screening Kit

제품 개요

유전체 편집 실험의 주요 병목 중 하나는 성공적으로 교정된 SNP나 삽입을 효율적으로 검출하는 방법의 부족입니다. 일반적으로 시퀀싱을 통해 편집 여부를 확인하지만, 이는 단일 세포 클론의 분리 및 증식이 필요하고 분석이 복잡할 수 있습니다.
Guide-it Knockin Screening Kit는 이 문제를 해결하기 위해 개발된 간편한 형광 기반 검출 키트로, 이질적 또는 클론 세포 집단 모두에서 원하는 위치의 정밀한 편집을 식별할 수 있습니다. 분석은 약 4시간 이내에 완료되며, 기본적인 실험 장비만으로 수행할 수 있습니다.

주요 특징

• SNP 및 삽입 교정 검출용 형광 기반 분석
• 4시간 내 완성되는 간편한 프로토콜
• 혼합 세포 및 단일 클론 모두에 적용 가능
• 표준 plate reader 또는 qPCR 장비로 판독 가능
• HDR 기반 정밀 교정 검출에 최적화

응용 및 원리

CRISPR/Cas 시스템과 같은 유전자 교정 기술은 특정 유전체 위치에 정밀한 변화를 도입할 수 있지만, 이러한 교정은 낮은 빈도의 HDR(상동 재조합 수선)에 의존하기 때문에 성공률이 낮습니다.
Guide-it Knockin Screening Kit는 이러한 HDR 성공 여부를 두 단계에서 민감하게 검출할 수 있도록 설계되었습니다.

1. 편집 조건 최적화 단계: 집단 내 HDR 효율을 평가하여 실험 조건을 최적화
2. 클론 선별 단계: 96웰 플레이트에서 단일 세포 클론 확립 후 원하는 변이를 가진 세포주 식별

작동 원리

본 키트는 다음의 두 단계로 구성됩니다.

1. PCR 증폭: 목표 유전자의 교정 부위 증폭
2. 효소 기반 형광 분석: 전용 올리고를 사용하여 SNP 또는 삽입 여부를 검출

이때 형광 신호는 표준 plate reader 또는 qPCR 장비로 측정할 수 있으며, 양성 형광 신호는 정확한 교정이 이루어졌음을 의미합니다.
특히 SNP 교정의 경우, 이 키트를 통해 혼합 집단 및 단일 클론에서 단일 염기 치환을 높은 민감도로 검출할 수 있으며, 이형접합 클론(편집된 대립유전자 1개, 비편집 대립유전자 1개)을 양성으로 식별할 수 있습니다.
더 긴 서열의 knock-in 삽입의 경우, 삽입 서열의 5’ 및 3’ 말단에서의 정확한 삽입을 동시에 검출할 수 있습니다.

관련 리소스

• Oligo Design Tool for SNP Screening