Takara Genome-wide sgRNA library system
인간 세포주에서 CRISPR/Cas9 기반 전장 유전자 knockout 스크리닝을 수행할 수 있는 렌티바이러스 sgRNA 라이브러리 시스템. 19,000개 유전자 대상 76,000개 sgRNA 포함. NGS 분석용 키트와 함께 사용 가능하며, 고효율 Cas9-sgRNA 상호작용을 위한 개선된 스캐폴드 디자인 제공.
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Takara · Takara Genome-wide sgRNA library system
Takara Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library System
제품 개요
Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library System은 인간 세포주에서 CRISPR/Cas9을 이용한 렌티바이러스 기반 전장 유전자 knockout 스크리닝을 손쉽게 수행할 수 있도록 설계된 시스템입니다. 각 스크리닝 세트에는 전장 sgRNA 라이브러리와 Cas9 발현 시스템이 포함되어 있으며, Lenti-X Single Shots 포맷을 통해 Cas9 및 sgRNA 라이브러리를 안정적으로 발현하는 세포주를 제작할 수 있습니다.
이 라이브러리는 Brunello 라이브러리(Doench et al. 2016; Doench, 2018)를 기반으로 하며, 약 19,000개의 유전자를 표적화하는 76,000개 이상의 sgRNA를 포함하고 있습니다. 각 유전자당 4개의 고활성 가이드가 포함되어 있으며, 비표적 sgRNA 컨트롤도 포함되어 있습니다.
NGS 분석
스크리닝 수행 후, Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library NGS Analysis Kit를 이용해 NGS 분석을 진행할 수 있습니다. 해당 키트는 sgRNA 라이브러리로 형질전환된 세포에서 NGS 샘플을 준비하기 위한 프라이머 및 시약을 포함합니다.
제조 및 품질 관리
이 라이브러리는 sgRNA의 균일한 분포를 보장하기 위해 정밀하게 제조되었습니다. 라이브러리 합성, 증폭, 바이러스 생산, 세포 전달의 모든 단계에서 sgRNA 분포를 측정하였으며, 건조된 렌티바이러스 형태로 제공됩니다.
각 로트는 NGS 분석을 통해 명시된 sgRNA 중 90% 이상이 10배 이내의 분포 범위 내에 존재함을 검증받습니다.
또한 pLVXS-sgRNA-mCherry-hyg 벡터의 sgRNA 스캐폴드 디자인을 개선하여 Cas9-sgRNA 상호작용을 향상시켜 높은 유전자 편집 효율을 제공합니다.
사용 방법
- 건조된 라이브러리 믹스에 물을 첨가하여 재구성합니다.
- 재구성된 라이브러리를 [Lenti-X 293T cells]에 첨가하여 바이러스 입자를 생산합니다.
- 바이러스 패키징은 [Lenti-X Packaging Single Shots]를 사용하여 고역가의 안정적인 생산이 가능합니다.
주요 특징 요약
| 항목 | 내용 |
|---|---|
| 시스템 구성 | Genome-wide sgRNA 라이브러리 + Cas9 발현 시스템 |
| sgRNA 수 | >76,000 |
| 표적 유전자 수 | 약 19,000 |
| 포맷 | Lenti-X Single Shots (건조 렌티바이러스 형태) |
| 품질 검증 | NGS 분석으로 sgRNA 분포 확인 (>90% 포함, 10배 분포 범위) |
| 기반 라이브러리 | Brunello 라이브러리 (Doench et al. 2016; Doench, 2018) |
| 개선 요소 | 향상된 sgRNA 스캐폴드 디자인 |
| 분석 키트 | Guide-it CRISPR Genome-Wide sgRNA Library NGS Analysis Kit |
| 세포주 | Lenti-X 293T cells |
제품 이미지
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