Thermo Fisher Scientific CellSensor LEF/TCF-bla SW480 Cell Line

Thermo Fisher Scientific CellSensor™ LEF/TCF-bla SW480 Cell Line

CellSensor™ LEF/TCF-bla SW480 세포주는 lymphoid enhancer factor/T cell factor (LEF/TCF) 결합 서열의 조절하에 베타-락타마제 리포터 유전자를 발현하도록 설계된 세포주입니다. 이 리포터는 SW480 세포에 안정적으로 통합되어 있으며, 해당 세포는 종양 억제 단백질인 adenomatous polyposis coli (APC)의 절단된 형태를 발현합니다.

이 세포주는 유세포분석(flow cytometry)을 통해 분리된 클론성 집단으로, 베타-카테닌에 대한 RNAi를 이용해 경로 검증이 완료되었습니다. APC 단백질의 기능 상실로 인해 베타-카테닌 파괴 복합체의 조립이 방해받으며, 비복합화된 베타-카테닌이 축적되어 Wnt 신호전달 경로가 지속적으로 활성화됩니다. 이러한 경로는 Wnt 리간드에 의한 추가 자극에 반응하지 않습니다.

이 세포주는 DMSO 농도 및 세포 수에 따른 어세이 성능이 검증되었습니다. 경로의 지속적 활성 상태와 알려진 억제제의 부재로 인해, 최적화 연구는 베타-락타마제 억제제인 클라불라닉산(clavulonic acid)을 사용하여 수행되었습니다. 클라불라닉산 처리는 신호 경로의 완전한 억제를 모방하여 최대 어세이 윈도우를 확인할 수 있도록 합니다.

Wnt/β-catenin 신호전달은 발달 및 항상성 유지에 중요한 역할을 하며, 대장암을 비롯한 다양한 암에서 이 경로의 이상이 관찰됩니다. Wnt 리간드가 frizzled 수용체에 결합하면, dishevelled 단백질을 통해 GSK3B의 활성이 억제되고, APC-GSK3B-axin으로 구성된 복합체가 분해되어 β-catenin이 세포질에 축적됩니다. 축적된 β-catenin은 핵 내 LEF/TCF 전사인자와 결합하여 c-myc, c-jun, fra, cyclin D1 등의 표적 유전자를 발현시킵니다.

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