Takara Efficient preparation of cDNA: PrimeScript Reverse Transcriptase

Overview

• 강력한 strand-displacement 및 연장 능력으로 최대 12 kb의 full-length cDNA 합성 가능
• 42°C에서의 반응으로 RNA 분해를 최소화하여 높은 수율과 낮은 배경 확보
• 5종의 상용 역전사효소 중 가장 낮은 오류율
• 비특이적 결합이 적고, 불완전 변성 RNA에도 높은 특이성
• GC-rich 및 2차 구조가 복잡한 RNA에서도 우수한 성능
• 민감도가 높아 RNA 샘플 소모를 최소화
• 30분(긴 전사체의 경우 60분) 내 반응 완료

Applications

• RT-PCR
• First-strand cDNA 합성
• cDNA 프로브 제작
• Full-length cDNA 비율이 높은 cDNA 라이브러리 합성

Standard Protocol

1. 다음 혼합물을 마이크로튜브에 준비합니다.

* Random Primer(6-mer) 사용 시 50 pmol, gene-specific primer 사용 시 2 pmol 사용.

2. 65°C에서 5분 가열 후 즉시 얼음에 냉각.
3. 다음 구성으로 20 µl 반응 혼합물을 준비합니다.

4. 부드럽게 혼합합니다.
5. 다음 조건으로 반응을 수행합니다.

* Random primer 사용 시 필수 단계입니다.
** 복잡한 2차 구조를 가진 RNA에도 강력한 연장 능력을 보이므로 일반적으로 42°C 권장. RT-PCR에서 PCR 역방향 프라이머를 RT 프라이머로 사용하는 경우, 비특이적 증폭을 줄이기 위해 50°C에서 30분 반응 권장.

6. 70°C에서 15분 반응 후 얼음에 냉각. 생성된 cDNA는 2nd-strand 합성 또는 PCR 템플릿으로 사용 가능.

Components

Cat. #2680A

Buffer Composition

Unit Definition

1 unit은 poly(rA), oligo(dT)12–18을 primer-template으로 사용하여 37°C에서 10분간 1 nmol의 [³H]dTTP를 포함시키는 효소의 양을 의미합니다.

Reaction Mixture for Unit Definition

• 50 mM Tris-HCl, pH 8.3
• 75 mM KCl
• 8 mM MgCl₂
• 10 mM DTT
• 20 µg/ml (ra)n (dT)12–18
• 0.5 mM [³H]dTTP
• 0.1% NP-40

Storage Buffer Composition

• 20 mM Tris-HCl, pH 7.8
• 100 mM NaCl
• 1 mM EDTA
• 1 mM DTT
• 50% Glycerol (v/v)

Choosing a PrimeScript Kit for Endpoint RT-PCR

Additional Product Information

제품의 저장 조건, 구성 성분 및 기술 사양은 Certificate of Analysis에서 확인할 수 있습니다. Kit Components List를 통해 구성품 상세 정보를 확인하세요. 두 문서는 제품 페이지의 Documents 탭에서 확인 가능합니다.