Thermo Fisher Scientific Exonuclease VII

Thermo Fisher Scientific Exonuclease VII

Exonuclease VII는 5'→3' 및 3'→5' 엑소뉴클레아제 활성을 가지며, 단일가닥 DNA에 특이적으로 작용하는 양방향 엑소뉴클레아제입니다. EDTA 존재 시 완전 활성화되므로 2가 양이온 요구 조건이 없습니다. 초기 반응 산물은 산 불용성 올리고뉴클레오티드이며, 이후 산 가용성 형태로 변환됩니다. 제한된 분해 산물은 분자량이 작은 올리고머(이량체∼도데카머)입니다.

특성

순도

SDS-PAGE로 확인된 95% 이상 순도. 엔도뉴클레아제, 이중가닥 엑소뉴클레아제, 리보핵산분해효소 오염 테스트 완료.

저장 완충액

50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 200 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 10 mM DTT, 50% 글리세롤.

분석 조건

반응 혼합물(50 μL):

• 50 mM Tris-HCl (pH 7.9)
• 50 mM 인산칼륨 (pH 7.6)
• 8.3 mM EDTA
• 10 mM 2-메르캅토에탄올
• 비변성 DNA 및 효소 포함

단위 정의

한 단위(Unit)는 표준 분석 조건하에서 37 °C에서 30분 동안 1 nmol의 뉴클레오티드를 산-가용성 뉴클레오티드로 전환하는 데 필요한 효소의 양입니다.

농도

10 단위/μL

소스

E. coli 균주로부터 생산되며, Exonuclease VII의 대형(xseA) 및 소형(xseB) 소단위를 모두 인코딩하는 과다 생산 클론을 포함합니다.

프로토콜 (일반 반응 조건, 50 μL)

• 70 mM Tris-HCl (pH 8.0)
• 8 mM EDTA
• 10 mM 2-메르캅토에탄올
• 1 μg DNA
• 50 μg/mL
• 0.2 단위 Exonuclease VII

37 °C에서 30분간 배양 후, 95 °C에서 10분간 가열하여 효소를 비활성화합니다.
참고: Exonuclease VII은 EDTA에 의해 억제되지 않습니다.

희석 완충액

50 mM Tris (pH 7.9), 1 mM DTT, 0.5 mg/mL 아세틸화 BSA.

애플리케이션

1. 게놈 DNA에서 인트론 위치 매핑
2. 폴리(dA-T) 꼬리를 가진 삽입체에서 벡터 DNA 제거
3. 여분의 PCR 프라이머 제거
4. 제한 엔도뉴클레아제 생성 단일가닥 돌출부 제거

사양