Takara Helper-free expression system (CMV promoter)
AAVpro Helper Free System은 헬퍼 바이러스 없이 AAV 입자를 제작하는 키트로, CMV 프로모터를 통해 강력하고 지속적인 유전자 발현이 가능합니다. HEK293T 세포에 3종 플라스미드를 공동 형질감염하여 간편하게 AAV 입자를 생산할 수 있습니다. 생체 내(in vivo) 유전자 도입 시 AAVpro Purification Kit로 정제 필요.
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AAVpro Helper Free Expression System (CMV Promoter)
AAVpro Helper Free Systems는 헬퍼 바이러스 없이 AAV 입자를 제조할 수 있는 키트입니다. 생성된 AAV 입자는 강력하고 지속적인 CMV 프로모터를 통해 포유류 세포 또는 개체 수준에서 목표 유전자의 일시적 발현을 유도할 수 있습니다.
생체 내(in vivo) 유전자 도입 시에는 반드시 AAVpro Purification Kit를 이용한 정제가 필요합니다.
AAV 입자 제조 방법
각 키트에는 HEK293T 세포를 형질감염하여 재조합 AAV 입자를 제조하는 데 필요한 3종의 플라스미드가 포함되어 있습니다.
HEK293T 세포를 세 가지 플라스미드로 공동 형질감염 후, 2–3일 뒤 포함된 AAV Extraction Solution을 사용하여 입자를 추출합니다.
이 추출 용액은 단백질 및 핵산 오염을 최소화하면서 간단하고 효율적인 AAV 입자 분리를 가능하게 합니다.
구성 플라스미드
| 플라스미드 | 설명 |
|---|---|
| pAAV-CMV | 목표 유전자(GOI)를 클로닝하기 위한 플라스미드로 CMV 프로모터와 두 개의 ITR을 포함합니다. |
| pRC (pRC1, pRC2-mi342, pRC5, pRC6) | AAV의 Rep 및 Cap 유전자를 포함합니다. pRC2-mi342는 인간 microRNA인 has-miR-342 발현 카세트를 포함하여 일반 pRC2 대비 약 2배 높은 AAV 타이터를 제공합니다. |
| pHelper | 효율적인 AAV 생산에 필요한 adenovirus 유래 E2A, E4, VA 유전자를 포함합니다. |
참고 사항
- pAAV-CMV 벡터에 클로닝되는 목표 유전자의 크기는 2.5 kb 미만이어야 합니다. 이는 AAV 입자에 포장 가능한 DNA 크기 제한 때문입니다.
- 패키징 플라스미드(pRC 및 pHelper)는 대용량(1 mg) 단위로 별도 판매됩니다. 대규모 in vivo 연구에 적합합니다.
(AAVpro Packaging Plasmid)
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