Takara Bicistronic IRES vectors

Takara Bicistronic IRES Vectors

IRES를 포함한 이시스트로닉 벡터는 하나의 RNA 전사체로부터 두 개의 단백질을 각각 독립적으로 동시에 발현할 수 있게 합니다 (Jackson et al., 1990; Jang et al., 1988).

How does an IRES work?

엔세팔로미오카르디티스 바이러스(EMCV)의 IRES는 하나의 mRNA로부터 두 개의 오픈 리딩 프레임을 번역할 수 있게 합니다. 일반적인 진핵 mRNA의 번역 개시는 5' cap에서 시작되지만, IRES는 리보솜이 내부의 두 번째 위치에 결합해 번역을 개시하도록 합니다.
따라서 두 단백질이 동일한 이시스트로닉 mRNA 전사체에서 동시에 발현됩니다.

Takara의 pIRES 벡터는 중앙 IRES를 중심으로 두 개의 다중 클로닝 부위를 포함하여, 두 개의 관심 유전자를 클로닝하고 발현할 수 있도록 설계되었습니다.

pIRES vectors containing antibiotic selection markers

pIRESpuro3, pIREShyg3, pIRESneo3, pIRESbleo3 등의 벡터는 IRES 상류에 다중 클로닝 부위를 포함하며, 선택 마커가 IRES 이후에서 발현됩니다.
관심 유전자와 선택 마커가 동일한 RNA에서 번역되므로, 항생제 내성을 가진 콜로니의 거의 100%가 관심 단백질을 발현합니다.

모든 IRES 선택 벡터는 부분적으로 비활성화된 IRES를 포함하여, 선택 마커의 번역 효율을 낮추고 관심 단백질의 고발현 세포를 선별할 수 있도록 합니다 (Rees et al., 1996).

An IRES combined with a fluorescent protein

형광 단백질을 포함한 IRES 벡터는 표적 단백질과 형광 단백질의 공발현을 가능하게 합니다. 형광 현미경 또는 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질감염된 세포를 쉽게 식별할 수 있습니다.
사용 가능한 형광 단백질 옵션에는 다음이 포함됩니다.

• pLVX-IRES 벡터: mCherry, ZsGreen1, tdTomato
• pIRES2 벡터: AcGFP1, DsRed2, DsRed-Express

Overview

• 하나의 mRNA에서 관심 단백질과 항생제 내성 마커 또는 형광 단백질을 동시에 발현
• 고발현 세포를 신속하게 식별 가능
• 이시스트로닉 발현으로 빠르고 안정적인 클론 선별 가능
• 항생제 선택, 형광 현미경, 유세포 분석 등 다양한 스크리닝 방식 선택 가능
• pLVX 벡터는 렌티바이러스 벡터로, 바이러스 입자 생성 시 렌티바이러스 패키징 시스템이 필요함

Applications

• 고수준 발현을 보이는 안정적인 클론을 신속하게 선별
• 항생제 선택, 형광 현미경, 유세포 분석을 통한 형질감염 세포 식별

References

• Jackson, R. J. et al., The novel mechanism of initiation of picornavirus RNA translation. Trends Biochem. Sci. 15:477–483 (1990).
• Jang, S. K. et al., A segment of the 5' nontranslated region of encephalomyocarditis virus RNA directs internal entry of ribosomes during in vitro translation. J. Virol. 62:2636–2643 (1988).
• Rees, S. et al., Bicistronic vector for the creation of stable mammalian cell lines that predisposes all antibiotic-resistant cells to express recombinant protein. BioTechniques 20:102–110 (1996).

Additional Product Information

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