Thermo Fisher Scientific Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP), 1000 Units

Thermo Fisher Scientific Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP), 1000 Units

제품 개요

Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP)는 고특이 활성의 열불안정성 알칼리 포스파타아제로, 재조합 원천에서 정제되었습니다. Pandalus borealis (북극 새우)에서 유래된 효소로 DNA 또는 RNA의 인산화 말단 탈인산화에 사용됩니다. 클로닝 시 선형화된 플라스미드 DNA의 재결합을 방지하며, PCR 후 남은 dNTP를 제거하여 DNA 시퀀싱 또는 SNP 분석 전처리에 유용합니다.

주요 특징

• 65°C에서 15분 가열 시 100% 불활성화
• 낮은 온도에서 우수한 저장 안정성
• 매우 높은 특이 활성
• DNA, RNA, dNTP 및 단백질의 5’-인산 제거
• 재조합 효소로 동물 유래 성분 불필요
• 다양한 버퍼에서 직접 작동 가능
• PCR 산물의 dNTP 제거에 용이

성능 및 응용

SAP는 Calf Intestinal Alkaline Phosphatase(CIAP)와 유사한 특이 활성을 가지며, 대부분의 제한효소 반응 버퍼에서 활성합니다. CIAP과 달리 SAP는 65°C에서 15분 가열 시 완전히 불활성화되어 후속 반응에 간섭하지 않습니다. PCR 산물의 dNTP를 한 단계로 제거할 수 있어 시퀀싱, SNP 분석, 표지 반응 전처리에 특히 유용합니다.

재조합 SAP의 장점

• 동물 유래 의존성 제거
• 향상된 저장 안정성
• 배치 간 일관된 활성
• 100% 열 불활성화

물리적 특성

Assay 조건

반응 혼합물: 100mM glycine (pH 10.4), 1mM MgCl₂, 1mM ZnCl₂, 10mM p-nitrophenyl phosphate, 0.001–0.1 units SAP.
405 nm에서 흡광도 변화를 측정합니다 (3050 μL 반응 부피).

Unit 정의

1 Unit은 37°C, pH 10.4의 glycine buffer에서 1 μmol p-nitrophenyl phosphate를 1분 동안 가수분해하는 효소량입니다.

기능 시험

제한효소로 절단된 플라스미드(5–20 pmol 5’-말단)에 대해 0.1–0.5 units/pmol 처리 시 재결합율을 0.5% 이하로 감소시킵니다.

프로토콜

PCR 정제 및 시퀀싱 전처리용 ExoSAP-IT 프로토콜은 USB ExoSAP-IT Protocol을 참조하십시오.
ExoSAP-IT 구매 시 Exonuclease I 및 SAP를 이용한 PCR 정제 방법에 대한 라이선스가 포함됩니다.

포함된 버퍼

• 10X SAP Reaction Buffer (PN 70103): 200mM Tris-HCl (pH 8.0), 100mM MgCl₂
• SAP Dilution Buffer (1 mL, PN 72761): 50mM Tris-HCl (pH 8.0)

참고 문헌

1. Ruan, C.C., Samols, S.B., Fuller, C.W. (1990) Comments 17(1), United States Biochemical Corporation, Cleveland, OH.
2. Werle, E. et al. (1994) Nucleic Acids Res. 22, 4354–4355.
3. Hanke, M., Wink, M. (1994) BioTechniques 17, 858–860.

제품 사양