Thermo Fisher Scientific CloneMiner II cDNA Library Construction Kit

Invitrogen™ CloneMiner™ II cDNA Library Construction Kit

CloneMiner™ II cDNA Library Construction Kit는 2세대 CloneMiner™ kit로, 제한효소 클로닝 없이 대표성 높은 cDNA 라이브러리를 빠르게 구축할 수 있습니다. SuperScript™ III Reverse Transcriptase와 Gateway™ cloning 기술을 통합하여 전체 길이 클론을 효율적으로 확보할 수 있습니다. 이 키트를 사용하면 시간이 오래 걸리고 비효율적인 ligation 반응을 피할 수 있어 신속하게 대표성 높은 라이브러리를 만들 수 있습니다.

주요 특징

• 높은 일차 역가
• 넓은 평균 insert 크기
• 전체 길이 유전자 비율 극대화
• 제한효소 digestion과 ligation 없이 다양한 destination vector에 효율적 클로닝 가능

작동 원리

1. 전체 길이 cDNA의 높은 수율

CloneMiner™ II kit에는 SuperScript™ III Reverse Transcriptase가 포함되어 있습니다.
SuperScript™ III는 SuperScript™ II RT의 돌연변이 버전으로, 50°C에서 활성이며 반감기가 220분입니다.
RNase H 활성이 낮아 첫 strand 합성 중 RNA 변성을 줄이고 전체 길이 유전자 비율을 높입니다.

2. Gateway™ cloning 기술 적용

제한효소와 연결효소를 사용하지 않는 재조합 기반 클로닝 시스템인 Gateway™ 기술을 사용합니다.
각 cDNA insert는 Gateway™ donor vector의 complementary att 영역과 재조합하여 entry clone을 생성합니다.
이 entry clone은 Gateway™ expression vector와 재조합되어 expression clone을 형성합니다.
이를 통해 제한효소와 연결효소 사용을 대체하고, 원래 방향과 해독 프레임을 유지한 전체 길이 유전자 클로닝이 가능합니다.

기존 CloneMiner™ Kit와의 차이점

• 단순화된 프로토콜 적용
• SuperScript™ II RT → SuperScript™ III RT로 대체하여 cDNA 수율 향상
• Gateway™ BP Clonase™ Enzyme Mix → Gateway™ BP Clonase™ II Enzyme Mix로 개선 (효소와 버퍼를 단일 mix로 제공)

사양