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Norgen Small RNA Library Prep Kit for Illumina (Indexes 1–24)
SKU: 63600
Illumina 플랫폼에서 차세대 시퀀싱(NGS)을 위한 Small RNA 라이브러리 제작에 필요한 모든 시약과 구성품을 포함한 키트입니다. 어댑터, 프라이머, 효소 믹스, 버퍼 등 분자생물학적 시약과 함께, Norgen 특허 수지 기술을 이용한 정제 모듈이 포함되어 있어 각 단계에서 생성된 핵산 산물의 빠른 정제가 가능합니다. 혈장, 혈청, 소변 등 저농도 RNA 시료에도 최적화되어 있으며, 총 RNA 또는 small RNA 농축물 모두 입력으로 사용 가능합니다.
Features and Benefits
- 저농도 RNA(혈장, 혈청 등)에서 1ng 수준 입력에 최적화
- 단순하고 빠른 워크플로우 (5시간 이내 준비 가능)
- 특정 시료에서는 젤 정제 불필요
- 다양한 입력 RNA 시료(혈액, 혈장, 혈청, 소변 등)에 대응
- Norgen의 Total RNA 정제 기술과 완벽 호환
Workflow
| 단계 | 내용 | 소요 시간 |
|---|---|---|
| 1 | Input – Total RNA or enriched Small RNA | |
| 2 | 3’ Adaptor Ligation Kit | 65 mins |
| 3 | Removal of Excess 3’ Adaptor | 25 mins |
| 4 | 5’ Adaptor Ligation Kit | 65 mins |
| 5 | cDNA Synthesis Kit | 65 mins |
| 6 | PCR Amplification and Indexing Kit | 30 mins |
| 7 | NGS Reaction Clean-up Kit | 20 mins |
Optional: Size Selection by PAGE → Library Purification
Final: Library ready for Illumina sequencing
Supporting Data
Figure 1
Agilent 2100 Bioanalyzer의 High Sensitivity DNA Chip을 이용해 합성 microRNA 혼합물을 입력으로 한 small RNA 라이브러리 분석 결과, 약 141 bp 단일 피크가 확인되어 Illumina 플랫폼 분석에 직접 사용 가능함.
| X축(bp) 값 | 35 | 141 | 232 | 246 | 331 | 416 | 457 | 528 | 676 | 761 | 1216 | 2045 | 3197 | 10180 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 단위 | [FU] |
Figure 2
6% Novex® TBE PAGE 젤에서 라이브러리(~140 bp)와 어댑터 다이머(~120 bp)가 분리됨. 어댑터 다이머는 band excision 시 제외해야 함.
| 번호 | 설명 |
|---|---|
| 1 | NGS MW Ladder |
| 2 | NGS Control Ladder |
| 3 | Sample Library |
| 항목 | 크기(bp) | 비고 |
|---|---|---|
| Library | ~140 bp | |
| Adaptor Dimer | ~120 bp | exclude from excision |
Figure 3
혈장 RNA 시료로부터 제작된 small RNA 라이브러리의 재현성 평가 결과, 평균 상관계수 99.3%로 높은 일관성 확보.
| Replicate | R² 값 |
|---|---|
| #1 | 0.997 |
| #2 | 0.9936 |
| #3 | 0.9922 |
| #4 | 0.9915 |
| #5 | 0.9892 |
| #6 | 0.9922 |
| Average | 99.3% |
Figure 4
Whole Blood, Paxgene™, Tempus™ 혈액 RNA 시료 비교 시 모든 조건에서 우수한 재현성(R² ≥ 0.97) 및 유사한 microRNA 검출 수 확인.
| 샘플 유형 | 비교 | R² |
|---|---|---|
| Paxgene #1 vs #2 | 0.9997 | |
| Tempus #1 vs #2 | 0.9979 | |
| Whole Blood #1 vs #2 | 0.9991 | |
| Paxgene vs Tempus | 0.9839 | |
| Paxgene vs Whole Blood | 0.9797 | |
| Tempus vs Whole Blood | 0.9932 |
Kit Specifications
| 항목 | 내용 |
|---|---|
| Number of preps | 24 |
| Number of indices provided | 12 (for 24 preps, indexes 1–24 or 25–48) |
| Time required to complete 6 libraries | As little as 5 hours |
| Input RNA required | As little as 50 pg |
Storage Conditions:
각 구성품은 -20°C, 4°C 또는 실온 보관 필요. 상세 조건은 박스 라벨 참조.
Kit Components
| Step | Component | Cat. 64600 (24 preps) |
|---|---|---|
| 3’ Adaptor Ligation | 3’ Adaptor (30 µL), Master Mix (320 µL), T4 RNA Ligase 2 (35 µL) | |
| 5’ Adaptor Ligation | 5’ Adaptor (30 µL), Master Mix (320 µL), T4 RNA Ligase 1 (35 µL) | |
| cDNA Synthesis | Reverse Primer (30 µL), Master Mix (220 µL), TruScript Reverse Transcriptase (35 µL) | |
| PCR Amplification | 2x NGS PCR Master Mix (1.32 µL), PCR Reverse Primer (81 µL), Forward Index Primer (별도 제공) | |
| Size Selection | NGS MW Ladder (50 µL), NGS Control Ladder (50 µL), Loading Dye (300 µL), Nuclease-Free Water (1.25 µL) |
| Component | Cat. 63500 (75 preps) |
|---|---|
| Buffer RL | 40 mL |
| Wash Solution A | 38 mL (Reconstituted to 128 mL) |
| Elution Solution A | 6 mL |
| Columns | 75 |
| Gel Filtration Columns | 24 |
| Collection Tubes | 75 |
| Elution Tubes | 75 |
| Product Insert | 1 |
Documentation
- Protocol (24 preps)
- Application Note: EXTRAClean RNA Isolation Technology
- SDS (Indexes 1–24)
- SDS (Indexes 25–48)
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