Thermo Scientific™

LightShift™ EMSA Optimization and Control Kit

Thermo Scientific LightShift EMSA Optimization and Control Kit는 EMSA(electrophoretic mobility shift assay)를 실행하여 단백질-DNA 결합 상호작용을 확인하고 특성을 분석하는 매우자세히 알아보기

Thermo Scientific LightShift EMSA Optimization and Control Kit는 EMSA(electrophoretic mobility shift assay)를 실행하여 단백질-DNA 결합 상호작용을 확인하고 특성을 분석하는 매우 견고하고 민감도 높은 시스템입니다. 이 키트에는 DNA 결합 상호작용을 설정하고 맞춤화하는 시약뿐 아니라, DNA와 단백질 추출물로 구성된 대조군 세트가 들어 있어 키트 시스템을 검사할 수 있습니다.

LightShift EMSA Optimization and Control Kit의 특징:

• 핵 추출물에서 미량 단백질을 검출하는 우수한 성능
• 방사성 방식과 다이곡시제닌(digoxigenin) 방식보다 우수한 민감도
• 유명한 DNA-단백질 상호작용에 대해 이전에 수립한 결합 조건 적용 가능
• 신규 사용자가 우수한 분석법을 개발하고 결합 특이성을 확인하는데 유용한 EBNA 제어 시스템 포함

LightShift EMSA 검출 원리는 웨스턴 블롯과 비슷합니다. 말단에 바이오틴이 표지된 duplex DNA는 핵 추출물이나 정제 인자와 함께 반응시킨후, 천연 겔(native gel)에서 전기영동하여 확인합니다. 그리고 나면 DNA는 신속하게(30분) 양의 나일론 막으로 전달되고, UV 교차연결되고, streptavidin-HRP 접합체로 조사되고 나서 기질을 사용해 배양됩니다. 표지부터 결과에 이르는 프로토콜을 단 하루만에 실시할 수 있습니다.

DNA와 단백질의 상호작용은 DNA 복제, 재조합 및 수복, 전사, 바이러스 어셈블리를 포함한 많은 세포 과정을 통제하는 데 있어 핵심적인 부분입니다. 유전자 조절 연구와 단백질:DNA 상호작용 확인에 핵심적인 한 가지 기법은 EMSA(electrophoretic mobility shift assay)입니다.

EMSA 기법은 비변성 polyacrylamide 또는 agarose 겔 전기영동을 적용하면 단백질:DNA 복합체가 자유 DNA 분자보다 느리게 이동한다는 관찰을 토대로 합니다. 단백질 결합 시 DNA 이동 속도는 바뀌거나 느려지기 때문에 이 분석을 겔 전이 또는 겔 지연 분석이라고도 합니다. EMSA의 개념이 정립되기 전에는 단백질:DNA 상호작용은 주로 nitrocellulose 필터-결합 분석을 사용해 연구되었습니다.

이 분석을 실시하려면 비오틴으로 말단 표지된 정제 DNA 표적, 검사할 단백질 추출물, 나일론 막(membrane), 기본 전기영동 장비만 있으면 됩니다. DNA 표적은 5또는 3 비오틴 표지로 합성되거나 Thermo Scientific Biotin 3` End DNA Labeling Kit(제품 번호 89818)를 사용해 합성한 후 표지될 수 있습니다.. 핵, 세포질, 전체 세포 단백질 추출물은 Thermo Scientific NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagent Kit(제품 번호 78833)를 비롯한 다양한 방법으로 채취할 수 있습니다.

관련 자료:

단백질-핵산 상호작용 기술 가이드
단백질-DNA 상호작용 검출 기술 가이드
겔 전이 분석(EMSA) 기술 가이드

관련 제품:
Biotin 3` End DNA Labeling Kit
NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Reagent Kit
Biodyne B Nylon Membrane for Chemiluminescent EMSA
Chemiluminescent Nucleic Acid Detection Module
LightShift Chemiluminescent RNA EMSA Kit

추가 제품 데이터
• Pierce G2 Fast Blotter를 사용한 Transfer EMSA 겔

사양

어세이EMSA Assay

형식Kit

포함10X Binding Buffer (1 mL), Biotin-EBNA Control DNA (50 μL), Unlabeled EBNA DNA (50 μL), EBNA Extract (125 μL), Poly dI·dC (125 μL), 50% Glycerol (500 μL), 1% NP-40 (500 μL), 1M KCl (1 mL), 100mM MgCl2 (500 μL), 200mM EDTA pH 8.0 (500 μL), 5X Loading Buffer (1 mL)

용도(장비)myECL™ Imager, X-Ray Film

제품라인LightShift™

제품 유형LightShift EMSA Optimization and Control Kit

수량100 Reactions

타겟 특이도Not Target-Specific

기술Gel Shift

Unit SizeEach