Invitrogen™

EasySelect™ Pichia Expression Kit

EasySelect™ Pichia Expression Kit는 yeast Pichia pastoris에서 단백질 생산에 필요한 모든 성분을 제공합니다. EasySelect™ Kit에는 Pichia 세포 transformation을 할 수자세히 알아보기

EasySelect™ Pichia Expression Kit는 yeast Pichia pastoris_에서 단백질 생산에 필요한 모든 성분을 제공합니다. EasySelect™ Kit에는 _Pichia 세포 transformation을 할 수 있는 Pichia yeast strain, expression vector, reagent가 들어있습니다. Zeocin™ antibiotic로 high-copy number transformed variant를 쉽게 스크리닝할 수 있습니다.

Pichia pastoris expression system의 장점:
• Pichia 세포를 _E. coli_처럼 쉽게 배양합니다.
• 다른 미생물 발현 세포보다 높은 세포 밀도를 얻을 수 있습니다.
• 다른 미생물 발현 시스템보다 세포 당 많은 단백질을 생성합니다.
• 진핵 생물 단백질 처리, 단백질 접힘(protein folding), post-translational modification의 장점이 있습니다.
• 진탕 플라스크(shake flask)에서 산업 규모 발효까지 쉽게 확장할 수 있습니다.

입증된 단백질 발현 시스템
Pichia pastoris_는 30년 이상 전세계 실험실 및 업계에서 인간을 비롯한 여러 종에서 수 백가지 단백질 생성에 사용되고 있습니다(Ref 1, 2, 3)._Pichia pastoris_는 박테리아(_E. coli) 또는 효모(Saccharomyces cerevisiae)처럼 쉽게 성장할 수 있으면서도 이런 시스템에서 많은 장점을 제공합니다(Ref 4)._Pichia pastoris_는 박테리아나 다른 효모보다 높은 세포 밀도로 성장할 수 있습니다._Pichia pastoris_는 메탄올을 탄소원으로 성장할 수 있어 상대적으로 저렴하게 산업 수준으로 확장할 수 있습니다.

AOX1 Promoter의 힘
EasySelect™ Pichia Expression Kit는 Pichia alcohol oxidase 1 (AOX1) 유전자에서 promoter를 사용해 단백질 생성을 촉진합니다. _Pichia pastoris_는 유일한 탄소원으로 메탄올에서 성장할 수 있습니다. 단일 메탄올을 탄소원으로 성장 시, AOX1 mRNA는 최대 5%의 total mRNA를 나타내고 AOX1 효소가 세포 무게의 최대 30%가 될 수 있습니다(Ref 5).

EasySelect™ Pichia Expression system은 pPICZ 및 pPICZα vector와 함께 제공됩니다.pPICZ 및 pPICZα vector에는 multiple cloning site (MCS)가 들어있어 AOX1 promoter의 통제 하에 원하는 유전자를 삽입할 수 있습니다. pPICZ 및 pPICZα vector에는 c-Myc tag도 들어있어 쉽게 검출할 수 있고 polyhistidine (6xHis) tag가 들어있어 단백질을 쉽게 검출하고 정제할 수 있습니다.

_Pichia pastoris_는 자연적으로 몇 개의 단백질을 분비하기 때문에 pPICZα vector에서 세포 외 신호 서열을 이용해 배양 배지로 단백질 분비를 촉진하여 downstream 정제를 간편하게 할 수 있습니다.

Zeocin™ Antibiotic으로 high-copy number 가능
EasySelect™ Pichia Expression Kit는 Zeocin™ antibiotic을 이용해 형질 전환된 Pichia 세포를 선택합니다. pPICZ 및 pPICZα vector에는 Zeocin™ antibiotic의 내성을 발하는 Streptoalloteichus hindustanus (Sh ble)_의 bleomycin 유전자가 들어있습니다. pPICZ 및 pPICZα vector는 _Pichia genome에 안정적으로 삽입될 수 있습니다. Zeocin™ antibiotic 농도를 높여 통합수와 단백질 발현 수준이 높은 클론을 쉽게 선정할 수 있습니다.

EasySelect™ Pichia Expression Kit에는 다음 구성품이 들어있습니다.
• 배양 시작을 위한 Pichia pastoris 및 E. coli strain의 stab vial.
• 형질 전환을 위한 competent Pichia cell 제조 시약.
• 관심 유전자를 삽입할 수 있는 AOX1 promoter 기반의 pPICZ 및 pPICZα vector.
• pPICZ vector에 유전자 삽입을 보장하는 sequencing primer.
• 형질 전환된 Pichia cell 선정을 위한 Zeocin™ antibiotic.

연구용으로만 사용할 수 있습니다. 진단 절차에 사용할 수 없습니다.

관련 링크
• pPICZ A, B, C vector용 산물 삽입 보기 (PDF).
• pPICZα A, B, C vector용 산물 삽입 보기(PDF).
• Zeocin™ antibiotic용 산물 삽입 보기(PDF).
• Invitrogen에서 이용할 수 있는 Pichia 프로토콜 제1판_에서 _Pichia pastoris 사용에 대해 더 알아보기.
• Invitrogen의 다른 Pichia 발현 시스템에 대해 알아보기.

참고문헌

1. Cereghino JL, Cregg JM.Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris.FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]
2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM.Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris.Curr Opin Biotechnol. 2002 Aug;13(4):329-32. [PubMed]
3. Cregg JM. Introduction: distinctions between Pichia pastoris and other expression systems. Methods Mol Biol. 2007;389:1-10. [PubMed]
4. Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. Expression in the yeast Pichia pastoris. Methods Enzymol. 2009;463:169-89. [PubMed]
5. Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA. Functional characterization of the two alcohol oxidase genes from the yeast Pichia pastoris. Mol Cell Biol. 1989 Mar;9(3):1316-23. [PubMed]

사양

항생제 내성 박테리아Zeocin™ (ZeoR)

박테리아 또는 효모 균주GS115, KM71H, X-33

클로닝 방법Restriction Enzyme⁄ MCS

셀 유형Yeast Cells

형식Kit

프로모터AOX1

종P. pastoris

VectorpPIC

발현 메커니즘Cell-Based Expression

발현 시스템Yeast

용도(애플리케이션)Protein Expression

제품라인EasySelect™

제품 유형Expression Kit

단백질 태그His Tag (6X), c-Myc Epitope Tag

수량1 Kit

선택 제제(진핵)Zeocin

Unit SizeEach