Thermo Fisher Scientific EasySelect Pichia Expression Kit

Thermo Fisher Scientific EasySelect™ Pichia Expression Kit

Invitrogen™ EasySelect™ Pichia Expression Kit는 yeast Pichia pastoris*에서 단백질 생산에 필요한 모든 구성 요소를 제공합니다. 이 키트에는 *Pichia 세포 형질전환을 위한 yeast strain, expression vector, 및 관련 시약이 포함되어 있습니다. Zeocin™ 항생제를 이용하여 고복제 클론을 쉽게 스크리닝할 수 있습니다.

Pichia pastoris Expression System의 장점

• Pichia 세포를 E. coli처럼 쉽게 배양 가능
• 높은 세포 밀도와 단백질 생산량
• 진핵 단백질 처리, 접힘(folding), post-translational modification 가능
• 진탕 플라스크에서 산업 규모 발효까지 확장 용이

입증된 단백질 발현 시스템

Pichia pastoris는 30년 이상 다양한 단백질 생산에 사용되어 왔습니다 (Ref 1–3).
E. coli나 Saccharomyces cerevisiae보다 높은 세포 밀도로 성장하며, 메탄올을 탄소원으로 사용하여 경제적인 대규모 배양이 가능합니다 (Ref 4).

AOX1 Promoter 기반 고발현

이 시스템은 Pichia alcohol oxidase 1 (AOX1) 유전자의 프로모터를 사용하여 단백질 발현을 촉진합니다. 메탄올을 유일한 탄소원으로 사용할 때 AOX1 mRNA는 전체 mRNA의 약 5%, AOX1 효소는 세포 단백질의 약 30%에 달합니다 (Ref 5).

pPICZ 및 pPICZα 벡터는 AOX1 프로모터 하에서 원하는 유전자를 발현하도록 설계되어 있으며, c-Myc 및 6xHis 태그가 포함되어 단백질 검출 및 정제가 용이합니다.
또한 pPICZα 벡터는 단백질의 세포 외 분비를 촉진하여 정제 과정을 간소화합니다.

Zeocin™ Antibiotic을 이용한 고복제 클론 선별

Zeocin™ 내성 유전자인 Sh ble*을 포함한 pPICZ 및 pPICZα 벡터를 통해 형질전환된 *Pichia 세포를 선택할 수 있습니다. Zeocin™ 농도를 조절하여 고복제 및 고발현 클론을 효율적으로 선별할 수 있습니다.

키트 구성품

• Pichia pastoris 및 E. coli strain (stab vial)
• Competent Pichia cell 제조 시약
• AOX1 promoter 기반 pPICZ 및 pPICZα vector
• Sequencing primer (pPICZ vector용)
• Zeocin™ antibiotic (형질전환 세포 선택용)

연구용으로만 사용하십시오. 진단 절차에는 사용할 수 없습니다.

관련 링크

• pPICZ A, B, C vector 매뉴얼 (PDF)
• pPICZα A, B, C vector 매뉴얼 (PDF)
• Zeocin™ antibiotic 매뉴얼 (PDF)
• Pichia Protocol 제1판 (Invitrogen)
• Invitrogen Pichia Expression Systems

참고문헌

1. Cereghino JL, Cregg JM. Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000;24(1):45–66.
2. Cereghino GP et al. Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. 2002;13(4):329–32.
3. Cregg JM. Introduction: distinctions between Pichia pastoris and other expression systems. Methods Mol Biol. 2007;389:1–10.
4. Cregg JM et al. Expression in the yeast Pichia pastoris. Methods Enzymol. 2009;463:169–89.
5. Cregg JM et al. Functional characterization of the two alcohol oxidase genes from the yeast Pichia pastoris. Mol Cell Biol. 1989;9(3):1316–23.

제품 사양