Thermo Fisher Scientific BLOCK-iT Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP

Invitrogen™ BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP

BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP는 기존 RNAi vector의 장점(안정적인 발현과 바이러스 전달 사용 능력)에 더해, 동일한 transcript에서 조직 특이적 발현 및 다중 표적 knockdown 능력을 결합한 혁신적인 시스템입니다.

이 키트에 포함된 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR vector는 표적 서열과 100% 동일한 인공 miRNA를 발현하여 표적 유전자의 발현을 억제합니다. 벡터에는 내재성(endogenous) miRNA 생성을 위한 flanking 및 loop 서열이 포함되어 있습니다.

수상 경력의 Invitrogen BLOCK-iT™ RNAi Designer를 사용하여 설계된 miRNA 서열의 70% 이상이 70% 이상의 knockdown 효율을 보입니다.

주요 특징

• Pol II 기반 발현: MultiSite Gateway™ 시스템을 통해 CMV promoter에서 강력한 발현 가능
• EmGFP 리포터 발현: EmGFP와 miRNA 발현이 동일 transcript에서 이루어져 knockdown 활성과 발현 수준의 상관관계 확인 가능
• 다양한 응용성: Lentiviral vector, Flp-In™ system 등 다양한 Gateway™ DEST vector와 호환
• 다중 유전자 조절: 동일 transcript에서 여러 miRNA 발현 가능하여 복합적 유전자 조절 및 합성 표현형 연구에 적합

작동 원리

pcDNA™6.2-GW/miR vector에는 높은 수준의 miR RNAi sequence 발현을 위한 CMV promoter가 포함되어 있습니다.
BLOCK-iT™ RNAi Designer에 RefSeq accession number 또는 nucleotide sequence를 입력하면, 소프트웨어가 표적 유전자와 100% 일치하는 최적화된 miRNA를 설계합니다.

간단한 ligation 프로토콜을 통해 miRNA를 vector에 삽입 후 transfection하면, 발현된 miRNA는 세포 내 Drosha 및 Dicer에 의해 처리되어 RISC에 통합됩니다. 최종적으로 siRNA와 유사하게 mRNA 표적을 절단하여 유전자 발현을 억제합니다.

설계된 miRNA 카세트(EmGFP, flanking 부위 포함)는 Gateway™ 재조합 반응(BP/LR reaction)을 통해 pDONR™ vector 및 DEST vector로 손쉽게 이동할 수 있습니다.

사양

제품 이미지