Norgen Homologous Recombination Assay Kit

Norgen Homologous Recombination Assay Kit

SKU: 35600
빠르고 민감한 상동 재조합 효율 측정용 도구

특징 및 장점

• 상동 재조합 효율을 빠르고 민감하게 측정
• 원핵 및 진핵 세포 모두에 사용 가능
• qPCR을 통한 상동 재조합 효율 정량화를 위한 모든 프라이머 포함

제품 설명

Norgen의 Homologous Recombination Assay Kit는 박테리아 및 포유류 세포에서 상동 재조합 효율을 빠르고 민감하게 측정할 수 있는 도구입니다.
키트 구성품은 다음과 같습니다:

1. dl-1 플라스미드
2. dl-2 플라스미드
3. 양성 대조 플라스미드
4. Assay 프라이머 혼합물
5. Universal 프라이머 혼합물

본 실험은 두 개의 결손(dl) 플라스미드를 세포에 공동 형질전환시킨 후, 플라스미드 DNA를 분리하고 qPCR을 통해 상동 재조합 효율을 정량화하는 방식으로 수행됩니다.
PCR을 이용하여 정성적 분석도 가능합니다. 제공된 프라이머 혼합물은 상동 재조합 산물만을 증폭하도록 설계되어 있으며, dl-1 또는 dl-2 플라스미드는 증폭하지 않습니다.

박테리아에서는 X-gal을 이용한 블루/화이트 스크리닝으로 재조합 효율을 평가할 수 있으며, 제공된 양성 대조 플라스미드는 기능적 LacZ 서열을 포함하여 DNA 분리 효율 또는 PCR 효율 확인용으로 사용할 수 있습니다.
PCR 기반 상동 재조합 분석은 민감도를 높이고 기존 단백질 발현 및 염색 기반 스크리닝보다 효율적이며, 고처리량 스크리닝에도 적합합니다.
본 키트는 최대 200회 변환 또는 24회 형질감염 실험을 수행할 수 있습니다.

Supporting Data

Figure 1. 상동 재조합 실험 도식
lacZα 코딩 영역이 변형된 두 플라스미드(dl-1, dl-2)가 공동 형질전환될 경우, 상동 재조합을 통해 기능적 lacZα 카세트가 형성됩니다.
결손 플라스미드만 존재할 때는 흰색 콜로니가 형성되며, 재조합된 플라스미드가 존재할 때는 파란색 콜로니가 형성됩니다.
재조합 효율은 파란색 콜로니의 비율로 계산됩니다.
(이미지에는 플라스미드, DNA 절단, 재조합, 배양 접시에서의 콜로니 형성 과정이 시각적으로 표현됨)

Figure 2. HEK 293 세포에서 플라스미드 DNA의 실시간 PCR 증폭
HEK 293 세포에 제공된 플라스미드를 형질감염 후 Norgen RNA/DNA/Protein Purification Kit로 DNA를 분리하여 qPCR 분석을 수행했습니다.
양성 대조군으로 50 ng의 positive control plasmid를, 재조합 샘플로 25 ng의 dl-1과 25 ng의 dl-2를, 음성 대조군으로 각각 50 ng의 dl-1 또는 dl-2를 사용했습니다.
PCR 기기의 판독 오차를 줄이기 위해 실험은 중복으로 수행되었습니다.

Figure 2 OCR 요약 정보:

저장 및 취급

모든 용액은 밀봉하여 -20°C 이하에서 보관해야 합니다.
배송일로부터 5년간 안정적으로 사용 가능합니다.

구성품

문서

Protocol:
(35600) Homologous Recombination Assay Kit - Protocol (200 transformations/24 transfections)

관련 제품

Plasmid MiniPrep Kit

Cat. 12300 / 50 Preps / Made in Canada
구성품:
| 구성품 | 용량 | 비고 |
|---------|------|------|
| Wash Solution E | 125 mL | For laboratory use only |
| Lysis Buffer N | 40 mL | For laboratory use only |
| Buffer TN | 20 mL | For laboratory use only |
| Resuspension Solution A | 20 mL | For laboratory use only |
| Elution Buffer | 1 mL | For laboratory use only |

2X PCR Master Mix

PCR 기반 분석에 적합한 고효율 마스터 믹스

제품 이미지