
Norgen Small RNA Library Prep Kit for Illumina (Indexes 25-48)
Illumina 플랫폼용 소형 RNA 라이브러리 제작 키트로, 낮은 입력 RNA(최소 50pg)에서도 고품질 라이브러리 생성 가능. 5시간 이내 빠른 준비, 겔 정제 불필요. 혈액, 혈장, 혈청, 소변 등 다양한 시료에 최적화된 프로토콜 제공. Norgen의 특허 정제 기술로 높은 회수율 보장.
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Norgen Small RNA Library Prep Kit for Illumina (Indexes 25–48)
제품 개요
Illumina 플랫폼에서 차세대 시퀀싱(NGS)을 위한 소형 RNA 라이브러리를 생성하기 위한 모든 시약과 구성품을 포함한 키트입니다. 어댑터, 프라이머, 효소 혼합물 및 버퍼를 포함하며, Norgen의 특허 수지 기술을 활용한 정제 모듈이 제공되어 라이브러리 중간체 및 최종 산물의 회수율을 향상시킵니다.
주요 특징 및 장점
- 낮은 입력 RNA(최소 1ng, 혈장·혈청 등 체액 시료)에 최적화
- 5시간 이내 간편하고 빠른 워크플로우
- 특정 시료 유형에서 겔 정제 불필요
- 혈액, 혈장, 혈청, 소변 등 다양한 시료에 적용 가능
- Norgen의 Total RNA 정제 기술과 완벽 호환
Workflow
| 단계 | 설명 | 소요 시간 |
|---|---|---|
| 1 | Input – Total RNA or enriched Small RNA | |
| 2 | 3’ Adaptor Ligation Kit | 65 mins |
| 3 | Removal of Excess 3’ Adaptor | 25 mins |
| 4 | 5’ Adaptor Ligation Kit | 65 mins |
| 5 | cDNA Synthesis Kit | 65 mins |
| 6 | PCR Amplification and Indexing Kit | 30 mins |
| 7 | NGS Reaction Clean-up Kit | 20 mins |
Optional 단계: Size Selection by PAGE, Library Purification
최종 단계: Library ready for Illumina sequencing
Supporting Data
Figure 1. Purified Small RNA Library (Agilent 2100 Bioanalyzer)
Synthetic microRNAs를 입력으로 사용하여 제조된 라이브러리에서 약 141 bp 단일 피크가 확인됨. Illumina 시퀀싱에 직접 사용 가능.
데이터 포인트 (FU 단위):
35, 141, 232, 246, 331, 416, 457, 528, 676, 761, 1216, 2143, 3057, 10180
Figure 2. Small RNA Library (6% Novex® TBE PAGE Gel)
| Lane | 설명 |
|---|---|
| 1 | NGS MW Ladder |
| 2 | NGS Control Ladder |
| 3 | Sample Library |
| 밴드 | 크기 (bp) | 비고 |
|---|---|---|
| Library | ~140 bp | 샘플 라이브러리 |
| Adaptor Dimer | ~120 bp | 절단 시 제외 |
Figure 3. Reproducibility of Small RNA Libraries
혈장 RNA(200 µL EDTA-plasma)로부터 제조된 4개 복제 샘플 간 평균 상관계수 99.3% 확인.
| Replicate | R² 값 |
|---|---|
| #1 | 0.997, 0.9936, 0.9922 |
| #2 | 0.9915, 0.9892 |
| #3 | 0.9992 |
| Average | 99.3% |
Figure 4. Blood Sample Correlation Analysis
| 시료 유형 | 복제 간 R² |
|---|---|
| Paxgene | 0.9997 |
| Tempus | 0.9991 |
| Whole Blood | 0.9991 |
Panel B: Whole Blood, Tempus, Paxgene 모두 유사한 microRNA 검출 수 확인
Panel C: 시료 간 상호 상관계수
- Paxgene vs Tempus: R² = 0.9839
- Whole Blood vs Paxgene: R² = 0.9797
- Whole Blood vs Tempus: R² = 0.9932
Kit Specifications
| 항목 | 내용 |
|---|---|
| Number of preps | 6 or 24 |
| Number of indices provided | 6 (6 preps) 또는 12 (24 preps, Indexes 1–24 또는 25–48) |
| Time required | 약 5시간 |
| Input RNA required | 최소 50 pg |
Storage Conditions and Product Stability
일부 구성품은 -20°C, 4°C 또는 실온 보관 필요. 각 구성품 및 박스 라벨을 참고하십시오.
구성품 (Cat. 64600, 24 preps)
| Step | Component | Volume |
|---|---|---|
| 3’ Adaptor Ligation | 3’ Adaptor | 30 µL |
| Ligation Master Mix | 320 µL | |
| T4 RNA Ligase 2 (Truncated) | 35 µL | |
| 5’ Adaptor Ligation | 5’ Adaptor | 30 µL |
| Ligation Master Mix | 320 µL | |
| T4 RNA Ligase 1 | 35 µL | |
| cDNA Synthesis | Reverse Primer | 30 µL |
| Master Mix | 220 µL | |
| TruScript Reverse Transcriptase | 35 µL | |
| PCR Amplification | 2x NGS PCR Master Mix | 1.32 µL |
| PCR Reverse Primer | 81 µL | |
| Forward Index Primer | 별도 제공 (#64640 또는 #64610) | |
| Size Selection | NGS MW Ladder | 50 µL |
| NGS Control Ladder | 50 µL | |
| Loading Dye | 300 µL | |
| Nuclease-Free Water | 1.25 µL |
Purification Module (Cat. 63500, 75 preps)
| Component | Volume / 수량 |
|---|---|
| Buffer RL | 40 mL |
| Wash Solution A | 38 mL (재구성 후 128 mL) |
| Elution Solution A | 6 mL |
| Columns | 75 |
| Gel Filtration Columns | 24 |
| Collection Tubes | 75 |
| Elution Tubes | 75 |
| Product Insert | 1 |
Documentation
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