Takara Soluble protein expression: single-protein production system

Overview

Principle of the SPP System

MazF (mRNA Interferase) 단백질은 ACA 서열에서 단일가닥 RNA를 절단하는 서열 특이적 엔도리보뉴클레이스입니다. MazF 발현으로 대부분의 세포 내 mRNA 발현이 억제되며, 유도 후 최대 72시간 동안 목표 단백질의 합성이 지속됩니다.
SPP 시스템은 두 개의 플라스미드로 구성됩니다.

• ACA 서열이 제거된 목표 유전자를 발현하는 ACA-less pCold 벡터
• MazF 단백질을 유도 발현하는 MazF 발현 벡터

이 시스템은 pCold 단독 시스템보다 숙주 단백질 발현을 효과적으로 억제하여, 다양한 단백질의 고순도·고효율 발현 및 표지 효율 향상을 가능하게 합니다. 또한 NMR(핵자기 공명) 분석 등 용해성 단백질 발현 응용에도 적합합니다.

SPP 시스템은 Takara Bio와 미국 University of Medicine and Dentistry of New Jersey의 Dr. Masayori Inouye의 공동 연구로 개발되었습니다.

Applications

• 정제 단백질 발현
• 방사성 동위원소 표지 (신규 발현 단백질의 약 90%가 목표 단백질로 표지됨)
• NMR 분석

Components

SPP System II (Cat. #3368)

SPP System III (Cat. #3369)

SPP System IV (Cat. #3370)

Additional Information

발현 플라스미드는 ACA 서열이 제거된 E. coli-유래 단백질 envZB의 ORF를 pCold I (SP-4) DNA에 삽입하여 제작되었습니다. 발현 단백질의 예상 분자량은 19.6 kDa입니다.

References

1. Qing, G. et al. Cold-shock induced high-yield protein production in Escherichia coli. Nat Biotechnol 22, 877–882 (2004).
2. Suzuki, M., Zhang, J., Liu, M., Woychik, N. A. & Inouye, M. Single protein production in living cells facilitated by an mRNA interferase. Mol. Cell 18, 253–261 (2005).
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4. Zhang, Y., Zhang, J., Hara, H., Kato, I. & Inouye, M. Insights into the mRNA cleavage mechanism by MazF, an mRNA interferase. J. Biol. Chem. 280, 3143–3150 (2005).