Thermo Fisher Scientific Pierce RNA 3` End Desthiobiotinylation Kit

Thermo Scientific™ Pierce™ RNA 3' End Desthiobiotinylation Kit

Thermo Scientific Pierce RNA 3'-End Desthiobiotinylation Kit는 RNA의 3' 말단을 desthiobiotin으로 간편하고 효율적으로 표지할 수 있는 시약을 제공합니다. 표지된 RNA는 프로브로 사용하거나 RNA 결합 단백질(RBP)의 농축 실험 등에 활용할 수 있습니다.

주요 특징

• 비방사성(non-radioactive): 단일 비오틴 표지로 방사성 동위원소 수준의 검출 민감도 제공
• 간편한 사용: RNA ligase와 최적화된 반응 버퍼 포함
• 경제적: 합성 비오틴화 RNA 프로브 대비 저비용
• 말단 표지 방식: RNA 2차 구조에 최소한의 영향
• 유연한 활용성: 탐지용 또는 streptavidin resin 친화 핸들로 사용 가능

제품 설명

이 키트는 T4 RNA ligase를 이용해 단일가닥 RNA의 3' 말단에 desthiobiotinylated cytidine bisphosphate를 부착합니다. 표지된 RNA는 gel-shift EMSA, Northern blot, 단백질-RNA 상호작용 연구 등에 사용 가능합니다.
Desthiobiotin 표지는 streptavidin resin과 결합하며, 완만한 조건에서 리보핵단백질 복합체를 용출할 수 있습니다. 본 키트는 Thermo Scientific Pierce Magnetic RNA-Protein Pull-Down Kit의 구성품으로도 포함됩니다.

구성품

• Desthiobiotinylated cytidine bisphosphate
• T4 RNA ligase 및 반응 버퍼
• 양성 대조용 비표지 RNA 올리고뉴클레오타이드
• 비오틴화 RNA 프로브 표준물질
• RNase 억제제, 글리코겐, 결합 촉진 시약

적용 분야

• Northern blotting
• EMSA
• RNA 결합 단백질(RBP) 농축

반응 조건

• 표준 반응량: 50 pmol RNA
• 반응 범위: 1 pmol ~ 1 nmol (확장 가능)
• 반응 시간: 30분 (37°C, 단순 RNA) ~ Overnight (4–16°C, 복잡 RNA)
• 복잡한 RNA의 경우 RNA:nucleotide 비율 조정, 반응 시간 연장 또는 DMSO 첨가로 효율 최적화 가능

실험 예시

합성 RNA 및 in vitro 전사 RNA를 대상으로 반응 효율을 평가한 결과, 대부분의 표지 효율이 50% 이상, 일부는 70% 이상을 기록했습니다. 키트의 대조 RNA는 90% 이상의 효율을 보여 반응 조건의 품질을 확인할 수 있습니다.
또한 let-7 miRNA와 Lin28 단백질의 상호작용 실험에서, desthiobiotin으로 표지된 let-7 miRNA가 NCCIT 세포 용해액에서 Lin28 단백질을 특이적으로 농축함을 확인했습니다.

사양