Thermo Fisher Scientific pcDNA4/TO Mammalian Expression Vector

Invitrogen™ pcDNA™4/TO Mammalian Expression Vector

개요

pcDNA™4/TO 벡터는 Tetracycline 유도형 발현 시스템(T-REx™ System) 을 기반으로 하며, 바이러스 전사활성화 인자를 사용하지 않고도 높은 수준의 유도 발현을 제공합니다. 이 시스템은 강력한 CMV 프로모터에 세균성 tetracycline 저항 오페론의 조절 요소를 추가하여, 전사 억제 및 해제를 효과적으로 제어합니다.

특징

• 정밀한 발현 조절: Tetracycline이 없는 경우 TR 단백질이 TetO2 서열에 결합해 전사를 억제하며, tetracycline이 첨가되면 결합이 해제되어 발현이 유도됩니다.
• 높은 발현 효율: 완전한 CMV enhancer-promoter를 사용하여 유도 시 높은 수준의 발현 가능
• 바이러스 인자 비의존적: 비특이적 숙주 유전자 활성화 없이 안정적인 발현 가능
• 다양한 선택 마커: Zeocin™ 또는 hygromycin 저항 유전자를 통해 안정적인 세포주 선별 가능
• 편리한 단백질 검출 및 정제: pcDNA™4/TO/myc\-His 버전은 c-myc epitope과 6xHis tag를 포함하여 항체 검출 및 Ni-결합 수지를 이용한 정제가 용이

시스템 구성

T-REx™ 시스템은 다음과 같은 구성 요소로 이루어집니다:

1. pcDNA™4/TO 벡터 – 발현 벡터로서, TetO2 조절 서열을 포함한 CMV 프로모터 기반
2. pcDNA™6/TR 벡터 – tetracycline repressor(TR) 단백질 발현용 벡터로, Blasticidin 저항 유전자를 포함

작동 원리

1. CMV 프로모터의 TATA box와 전사 시작점 사이에 두 개의 TetO2 서열이 삽입되어 있음
2. TR 단백질이 TetO2 서열에 결합하면 전사가 억제됨
3. Tetracycline이 TR 단백질에 결합하면 구조 변화가 일어나 TetO2로부터 분리되어 전사가 재개됨
4. 결과적으로 CMV 프로모터로부터 유전자의 발현이 유도됨

사양

응용

• 유전자 기능 연구를 위한 발현 조절 시스템 구축
• 단백질 발현 및 정제 연구
• 안정적이고 재현성 높은 mammalian cell line 개발