Thermo Fisher Scientific Active Rap1 Pull-Down and Detection Kit

Thermo Fisher Scientific Active Rap1 Pull-Down and Detection Kit

The Thermo Scientific Pierce Active Rap1 Pull-Down and Detection Kit is a complete kit for selective enrichment and detection of GTP-bound Rap1 GTPase through specific protein interaction with the RalGDS protein-binding domain.

구성 및 특징

이 키트에는 다음 구성품이 포함됩니다:

• GST-RalGDS Rap-binding domain (RBD)
• Glutathione agarose resin
• Positive and negative controls (GTPγS and GDP)
• Lysis/binding/wash buffer
• Anti-Rap1 antibody
• Sample buffer
• Spin columns and collection tubes

Validated using lysates from NIH 3T3 cells, which exhibit robust Rap1 activity.

주요 특징

• Highly sensitive and accurate: 최적화된 시약과 특이적 항체, Western blot 절차로 정확한 대조 및 준정량 결과 제공
• Validated: Rap1 검출 기능 테스트 완료로 품질 및 성능 보증
• Compatible: 마우스, 랫, 인간 등 다양한 세포주에 적용 가능

응용 분야

• 세포 분화, 이동, 분열 및 세포골격 재배열 중 Rap1 GTPase 활성 추적
• 세포 접합 및 부착에서 활성 Rap1 신호 연구
• 성장인자 자극 후 Rap1 활성 모니터링
• Rap1 활성에 영향을 미치는 저분자 억제제 스크리닝

작동 원리

이 키트는 GTPγS로 처리된 세포 용해물(활성형 Rap1)과 GDP 처리된 용해물(비활성형 Rap1)을 비교하여 기능 및 특이성을 검증했습니다.

• GTPγS 처리: Rap1을 GTP-bound(active) 상태로 유지 → 강한 신호
• GDP 처리: Rap1을 GDP-bound(inactive) 상태로 유지 → 약한 또는 없음

Western blot 검출은 HRP-conjugated secondary antibody (Goat Anti-rabbit IgG, Part No. 31460) 및 Thermo Scientific SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate (Part No. 34080)를 사용하여 최적화되었습니다.
총 30회 pull-down assay 수행 가능.

Rap GTPase 배경

Rap GTPases는 Ras 계열의 GTPases로 Rap1a, Rap1b, Rap2 유전자에 의해 암호화됩니다.
Ras와 구조적으로 유사하지만 기능적으로는 다르며, Ras는 세포 증식과 생존에 관여하고 Rap1은 세포골격 재배열, 세포 부착 및 접합 형성에 관여합니다.

Rap1의 활성 조절은 GEFs(Guanine nucleotide Exchange Factors)와 GAPs(GTPase-Activating Proteins)에 의해 이루어집니다.

• GEFs: C3G, Epac1/2, RasGRP2, PDZ-GEF1/2, PLCε
• GAPs: Rap1GAP, Spa-1 family
• Effector proteins: RAPL, Riam, AF-6, Krit1, RacGEFs, Tiam1, Vav2, Rho GAPs, ARAP3 등
  Rap과 Ras, Rho GTPases 간에는 상호 작용(cross-talk)이 존재합니다.

참고 자료

• Measure activation of small GTPases via their specific downstream effectors

제품 사양

제품 이미지

(이미지 없음 또는 OCR 텍스트 통합 완료)