Merck Mouse Whole Genome SAM CRISPRa Pooled Lentiviral Library Kit Zeo

Mouse Whole Genome SAM CRISPRa Pooled Lentiviral Library Kit Zeo

포장

• 40 vials (각 5개 키트 구성품에 대해 8×25μL aliquots)

적용 분야

• CRISPR

배송 상태

• 드라이아이스

저장 온도

• −70°C

제품 설명

전사 활성화 인자 VP64가 뉴클레이즈 결손 SpCas9(dCas9)과 융합되어 CRISPR guide RNA(gRNA)와 리보뉴클레오프로틴 복합체(RNP)를 형성합니다. gRNA 스캐폴드의 stem 및 tetra-loop 서열은 최소 헤어핀 RNA 아프타머로 변형되어, 이들이 이합체화된 MS2 박테리오파지 코트 단백질과 선택적으로 결합합니다.
MS2 코트 단백질은 NF-kappaB(p65) 서브유닛과 인간 heat-shock factor 1(HSF1)의 활성화 도메인과 융합되어 있으며, gRNA는 2개의 아프타머를 포함하여 각 아프타머가 2개의 MS2 공동활성화 단백질을 결합할 수 있습니다. 따라서 각 CRISPR 타깃팅 활성화 복합체당 4개의 공동활성화 인자를 효과적으로 모집합니다.

dCas9-VP64, MS2-p65-HSF1 헬퍼 구조체 및 gRNA는 3개의 개별 플라스미드/렌티바이러스 입자로 제공됩니다.
배열형 gRNA 라이브러리(각 클론이 개별 웰에 존재)와 달리, 풀형 라이브러리는 수천 개의 gRNA를 단일 튜브에 포함하여 로보틱스나 특수 장비 없이도 전유전체 수준의 효율적인 스크리닝을 가능하게 합니다.

SAM CRISPR 라이브러리는 3개의 서브풀로 제공되며, 각 서브풀은 약 23,500개의 gRNA를 포함하고 RefSeqID당 3개의 gRNA를 제공합니다. 전체 유전체 라이브러리는 약 70,000개의 gRNA를 포함하며, 19,000개의 고유 유전자 심볼(대체 아이소폼 포함 23,500 RefSeqIDs)을 타깃합니다.

각 풀에는 100개의 비타깃(음성) 대조 gRNA가 포함되어 있어, 딥시퀀싱을 통한 gRNA 빈도 변화의 통계적 특성 분석 시 기준선으로 활용됩니다.
비타깃 gRNA는 표적 유전체와 최소한의 상동성을 가지며, 대조 세포 처리 시 대표성 변화가 거의 없습니다.
CRISPR 활성화 스크리닝 실험의 특성상, 양성 대조는 탐색할 표현형에 따라 실험적으로 결정해야 합니다.
이러한 대조군 구성은 실험 설계 및 데이터 분석에 다양한 옵션을 제공합니다.

제품 스펙 요약