Thermo Fisher Scientific GeneArt Site-Directed Mutagenesis System

GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis System

Invitrogen™ GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis System은 표적 구조에서 in vitro로 3시간 내에 돌연변이를 생성하는 간편하고 효율적인 첨단 방법을 제공합니다.
이 시스템은 기존 GeneTailor™ Site-Directed Mutagenesis System을 대체하는 완전히 재설계된 제품으로, Thermo Fisher Scientific의 돌연변이 유발 기술을 한 단계 발전시킨 솔루션입니다.

주요 특징

• 강력함: 최대 14 Kb 플라스미드에서 최대 12개의 nucleotide를 대체, 제거 또는 삽입 가능
• 효율성: 3 Kb 플라스미드 기준 90% 이상의 정확도로 원하는 돌연변이체 생성
• 신속성: 최소화된 작업 단계로 3시간 내 변이 유도 가능
• 높은 활용도: 플라스미드 크기나 DNA 원천에 상관없이 사용 가능하며, 특수 벡터나 숙주 균주 불필요

사용 원리

이 시스템은 DNA methylase의 내재적 특성, high-fidelity DNA polymerase, 재조합 효소 및 E. coli*의 천연 *McrBC endonuclease를 이용하여 돌연변이를 생성합니다.
원하는 돌연변이(최대 12개 nucleotides)를 프라이머에 삽입한 후 PCR, 재조합, transformation 단계를 거치면 의도한 돌연변이만 포함된 벡터를 얻을 수 있습니다(최대 90% 효율).
템플릿 벡터는 어떤 DNA 원천에서든 분리 가능하며(최대 14 Kb), 추가적인 클로닝이 필요한 경우 아래 제품과 함께 사용할 수 있습니다.

• GeneArt™ Seamless Cloning and Assembly Kit (Cat# A13288)
• GeneArt™ High-Order Genetic Assembly System (Cat# A13286)

최적화된 돌연변이유발 프로토콜

GeneArt™ 시스템은 DNA 메틸화와 증폭 단계를 단일 반응으로 통합하여 in vitro DpnI digestion 단계가 필요 없습니다.
메틸화 및 증폭 후 10분간의 in vitro 재조합 반응으로 콜로니 회수가 3–10배 증가하며, 변이 효율이 향상됩니다.
최종적으로 변이된 DNA를 DH5α™ E. coli cell에 transformation하면 모든 methylated parental DNA가 제거되어, 추가 정제나 digestion 없이 unmethylated 변이 산물만 남습니다.
다음 날 개별 콜로니를 선택하여 돌연변이를 확인할 수 있습니다.

사양