Thermo Fisher Scientific GeneArt CRISPR Nuclease mRNA

GeneArt™ CRISPR Nuclease mRNA

Invitrogen™ GeneArt™ CRISPR Nuclease mRNA는 새로운 제조 공정을 통해 향상된 품질과 성능을 제공합니다.
이 제품은 두 개의 핵 내 위치 신호(NLS)를 포함한 wild-type Cas9 mRNA로, Cas9 단백질의 핵 내 전달 효율을 높입니다.

mRNA 포맷은 트랜스펙션 준비가 완료된 상태로 제공되어, CRISPR 벡터 시스템 사용 시 필요한 복잡한 클로닝 단계를 생략할 수 있습니다. Cas9 mRNA는 타깃 특이적 guide RNA(gRNA)와 함께 공동 트랜스펙션되어, 목표 유전체 부위에서 이중 가닥 절단을 유도합니다.

플라스미드 기반 시스템보다 작은 RNA 포맷을 통해 세포 내 전달 효율과 유전자 편집 효율이 향상됩니다. 또한, 하나의 트랜스펙션으로 여러 gRNA를 이용한 다중 타깃 편집에도 사용할 수 있습니다.

How to obtain a gRNA sequence

CRISPR 기술을 이용한 유전체 편집에는 비암호화 guide RNA(gRNA)가 필요합니다.
gRNA는 타깃 특이적 CRISPR RNA(crRNA)와 trans-activating crRNA(tracrRNA)가 결합된 형태입니다.
타깃 서열(20 bp)은 PAM 모티프(NGG) 바로 상류에 위치해야 하며, PAM은 Cas9 결합을 위한 필수 요소입니다.
Cas9 단백질은 gRNA와 PAM의 인도를 받아 목표 DNA 부위에 결합하여 PAM으로부터 3 염기 상류에서 이중 가닥 절단(DSB)을 형성합니다.

GeneArt CRISPR Search and Design Tool을 사용하여 인간 및 마우스 유전체 전반의 60만 개 이상의 gRNA 서열을 검색할 수 있습니다.
이 도구는 오프타깃 가능성을 최소화하고, 엑손 지도 기반의 최적 gRNA를 추천합니다.

How to make gRNA

선정된 gRNA 서열을 제작하는 세 가지 방법이 있습니다:

1. GeneArt Precision gRNA Synthesis Kit: 템플릿 조립을 포함해 4시간 이내에 트랜스펙션 준비 완료 gRNA 합성 가능
2. GeneArt CRISPR Strings: T7 또는 U6 프로모터를 포함한 합성 DNA 템플릿으로, GeneArt CRISPR Search & Design Tool 또는 Order Form을 통해 주문 가능
3. GeneArt Custom Services: 맞춤형 in vitro 전사(IVT) gRNA 합성 및 정제 서비스 제공
   • 문의: 1-800-955-6288 x45682
   • 이메일: custom.services@lifetech.com

Resources

• Demonstrated protocol: Engineering stem cells with CRISPR-Cas9

Reference

1. Cong L, Ran FA, Cox D, Lin S, Barretto R, Habib N, Hsu PD, Wu X, Jiang W, Marraffini LA, Zhang F. (2013) Multiplex Genome Engineering Using CRISPR/Cas Systems. Science 339(6121):819–823.

제품 사양

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