Invitrogen™

GeneRacer™ Kit with SuperScript™ III RT and TOPO TA Cloning™ Kit for Sequencing

GeneRacer™는 첨단 RACE (rapid amplification of cDNA ends) 기술로 full-length 5´ 및 3´ cDNA end의 증폭 효율을 높입니다. GeneRacer™ Kit의자세히 알아보기

GeneRacer™는 첨단 RACE (rapid amplification of cDNA ends) 기술로 full-length 5´ 및 3´ cDNA end의 증폭 효율을 높입니다. GeneRacer™ Kit의 장점:

• 10 kb 이상의 transcript에서 cDNA 생성

• 세포당 30 copy 미만의 드문 transcript의full-length 5´ end 확보

• full-length 5´ 및 3´ ends를 클로닝하여 완전한 cDNA sequence 수립

GeneRacer™ Kit는 SuperScript™ III Reverse Transcriptase (RT)와 함께 사용해 복잡한 mRNA에서 full-length 5´ end 증폭을 개선할 수 있습니다. RNase H portion of SuperScript™ III RT는 cDNA 합성 중 mRNA 절단을 방지하도록 변형되었습니다. 이는 cDNA의 크기와 수율을 높입니다. SuperScript™ III RT는 야생형 RT보다 열안정성이 높습니다. 이로 고온에서 역전사가 가능하고 복잡한 template의 이차 구조를 느슨하게 하며 cDNA 합성이 완전하게 이루어지게 합니다.

*GeneRacer™의 작동기전
*
GeneRacer™ Kit는 full-length cDNA end를 포함한 transcript만 증폭시킵니다(1,2). 그림 1에 GeneRacer™ Kit의 작동기전이 도식되어 있습니다. 이 고급 프로토콜은 5´ capped mRNA만 특이적으로 표적하여 RNA 수준에서 시작합니다. 다음 단계에서 이 cap이 제거되고 GeneRacer™ RNA Oligo로 대체됩니다. 역전사 중 GeneRacer™ RNA Oligo 시퀀스가 cDNA에 통합됩니다. 완전히 역전사된 cDNA만 알려진 이 시퀀스를 포함합니다. 그러면 5´ RACE PCR가 GeneRacer™ RNA Oligo 시퀀스에 특이적인 GeneRacer™ 5´ Primer와 유전자 특이적 primer에서 시행됩니다. 그 결과 full-length 5´ cDNA 시퀀스를 담은 증폭 DNA를 얻게 됩니다.

*민감도 및 길이
*
To demonstrate the ability of the GeneRacer™ Kit의 full-length 5fi cDNA end 확보 성능을 입증하기 위해 알고 있는 transcription 시작 영역에 유전자 5fi end를 증폭시켰습니다. 총 RNA를 시작 물질로 하여 GeneRacer™ 프로토콜을 실시하였을 때 long transcripts (10 kb)와 0.01%의 드문 메시지(세포 당 30 copy)가 증폭되었습니다(그림 2).

사양

박테리아 또는 효모 균주TOP10

클로닝 방법TOPO TA

형식Kit

용도(애플리케이션)Reverse Transcription

포함GeneRacer Module: 2 x 1.5mL Sterile Water, 24μL RNaseOut, 6μL each Calf Intestinal Phosphatase (CIP), CIP Buffer, Tobacco Acid Pyrophosphatase (TAP), 10X TAP Buffer, T4 RNA Ligase, 10X T4 RNA Ligase Buffer, and 10mM ATP, 6 x 250ng GeneRacer RNA Oligo, 2 x 1mL Phenol/Chloroform, 36μL Mussel Glycogen, 200μL Sodium Acetate (3M), 225μL each GeneRacer 5Primer, 5 Nested Primer, 3Primer, and 3 Nested Primer, 20μL Control HeLa Total RNA (500ng/μL), 15μL each Control Primer A and Control Primer B.1; SuperScript III RT Module: 6μL SuperScript III Reverse Transcriptase (200U/μL), 24μL 5X First Strand Buffer, 15μL DTT (0.1M), 6μL RNaseH (2U/μL), 6μL Random Primers (100ng/μL), 6μL GeneRacer Oligo dT Primer (900ng/μL), 6μL dNTP Mix (10mM each), 10 S.N.A.P. Columns, TOPO TA Cloning Kit for Sequencing (-20°C), Sufficient reagents and One Shot TOP10 Chemically Competent E. coli

제품라인GeneRacer™, SuperScript™, TA Cloning™, TOPO™

제품 유형Cloning Kit

수량1 Kit

벡터pCR4-TOPO TA

Unit SizeEach