Thermo Fisher Scientific GeneRacer Kit with SuperScript III RT and TOPO TA Cloning Kit for Sequencing
Full-length 5′ 및 3′ cDNA end 증폭을 위한 RACE 기술 기반 키트로, SuperScript III RT와 TOPO TA Cloning Kit 포함. 고온에서도 안정적인 역전사 가능하며, 드문 transcript의 완전한 cDNA 확보에 최적화. 클로닝 및 시퀀싱용으로 적합.
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Thermo Fisher Scientific GeneRacer Kit with SuperScript III RT and TOPO TA Cloning Kit for Sequencing
Invitrogen™ GeneRacer™ Kit는 첨단 RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) 기술을 이용하여 full-length 5′ 및 3′ cDNA end의 증폭 효율을 극대화합니다. SuperScript™ III Reverse Transcriptase (RT) 및 TOPO TA Cloning™ Kit와 함께 사용하여 클로닝 및 시퀀싱에 최적화된 결과를 제공합니다.
주요 특징
- 10 kb 이상의 transcript에서 cDNA 생성
- 세포당 30 copy 미만의 드문 transcript의 full-length 5′ end 확보
- full-length 5′ 및 3′ ends를 클로닝하여 완전한 cDNA sequence 수립
- SuperScript™ III RT는 RNase H portion이 변형되어 mRNA 절단을 방지
- 높은 열안정성으로 복잡한 template의 이차 구조를 느슨하게 하여 완전한 cDNA 합성 가능
작동 기전
GeneRacer™ Kit는 full-length cDNA end를 포함한 transcript만 증폭시킵니다.
이 프로토콜은 5′ capped mRNA만을 특이적으로 표적하며, cap을 제거한 후 GeneRacer™ RNA Oligo로 대체합니다. 역전사 과정에서 이 시퀀스가 cDNA에 통합되어 완전히 역전사된 cDNA만 알려진 시퀀스를 포함합니다. 이후 GeneRacer™ 5′ Primer와 유전자 특이적 primer를 사용하여 5′ RACE PCR을 수행하면 full-length 5′ cDNA 시퀀스를 얻을 수 있습니다.
민감도 및 길이
GeneRacer™ Kit의 성능은 알려진 transcription 시작 영역에서 유전자 5′ end를 증폭함으로써 입증되었습니다. 총 RNA를 시작 물질로 사용하여 long transcripts (10 kb) 및 세포당 30 copy 미만의 드문 메시지를 성공적으로 증폭하였습니다.
사양
| 항목 | 내용 |
|---|---|
| 박테리아 또는 효모 균주 | TOP10 |
| 클로닝 방법 | TOPO TA |
| 형식 | Kit |
| 용도 (애플리케이션) | Reverse Transcription |
| 포함 구성품 | GeneRacer Module: 2 × 1.5 mL Sterile Water, 24 μL RNaseOut, 6 μL each Calf Intestinal Phosphatase (CIP), CIP Buffer, Tobacco Acid Pyrophosphatase (TAP), 10X TAP Buffer, T4 RNA Ligase, 10X T4 RNA Ligase Buffer, 10 mM ATP, 6 × 250 ng GeneRacer RNA Oligo, 2 × 1 mL Phenol/Chloroform, 36 μL Mussel Glycogen, 200 μL Sodium Acetate (3M), 225 μL each GeneRacer 5′ Primer, 5′ Nested Primer, 3′ Primer, 3′ Nested Primer, 20 μL Control HeLa Total RNA (500 ng/μL), 15 μL each Control Primer A and Control Primer B.1; SuperScript III RT Module: 6 μL SuperScript III Reverse Transcriptase (200 U/μL), 24 μL 5X First Strand Buffer, 15 μL DTT (0.1M), 6 μL RNaseH (2 U/μL), 6 μL Random Primers (100 ng/μL), 6 μL GeneRacer Oligo dT Primer (900 ng/μL), 6 μL dNTP Mix (10 mM each), 10 S.N.A.P. Columns, TOPO TA Cloning Kit for Sequencing (-20°C), Sufficient reagents and One Shot TOP10 Chemically Competent E. coli |
| 제품라인 | GeneRacer™, SuperScript™, TA Cloning™, TOPO™ |
| 제품 유형 | Cloning Kit |
| 수량 | 1 Kit |
| 벡터 | pCR4-TOPO TA |
| Unit Size | Each |
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