Thermo Fisher Scientific LanthaScreen STAT5 (JAK2 V617F) U2OS Cell Line

Thermo Fisher Scientific LanthaScreen™ STAT5 (JAK2 V617F) U2OS Cell Line

LanthaScreen™ GFP Cellular Assays는 살아있는 세포에서 다양한 표적 단백질의 번역 후 변형(post-translational modification)을 분석할 수 있도록 설계된 시스템입니다.
JAK2/STAT5 신호 전달 경로는 GM-CSF, IL-3, EPO 등의 사이토카인에 반응하여 혈액 세포 형성에 중요한 역할을 합니다.
최근 JAK2(V617F) 활성화 돌연변이가 다수의 골수증식질환(MPD) 환자에서 발견되면서, 이 변이체의 활성은 특정 MPD 형태에서 잠재적 치료 표적이 될 수 있음이 제시되었습니다.

이 세포주는 지속적으로 활성화된 돌연변이 키나아제 JAK2 V617F를 발현하도록 제작된 U2OS 세포주입니다.
GFP-STAT5를 함께 발현시켜 STAT5의 인산화 상태(Tyr 694/699)를 JAK2 V617F 억제제 처리 후 분석할 수 있습니다.
세포 용해물에서 anti-STAT5 [pTyr 694/699] 항체와 LanthaScreen™ terbium-anti-mouse 항체를 이용한 TR-FRET 분석으로 측정됩니다.

GFP-STAT5 Lentivirus를 U2OS 세포에 형질감염 후 Blasticidin으로 선별하였으며, 이후 Lipofectamine™ LTX를 사용해 GST-JAK2 V617F를 형질도입하고 Geneticin으로 선별하였습니다.
유세포 분석을 통해 GFP 형광을 기준으로 단일 클론을 확보하였으며, GFP-STAT5 및 GST-JAK2 V617F의 지속적 발현을 확인하였습니다.

이 세포주는 TR-FRET 기반 면역 어세이로 IC50 및 Z' 값을 최적 조건에서 검증하였으며, JAK Inhibitor I (Pyridone 6)을 사용하여 JAK2 V617F 매개 GFP-STAT5 인산화를 억제하는 성능을 평가했습니다.
또한 세포 플레이트 밀도, 자극 시간, DMSO 내성, 용해 및 평형화 시간 등 다양한 실험 조건에서의 성능도 테스트되었습니다.

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