Invitrogen™

pENTR™/D-TOPO™ Cloning Kit, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli

pENTR™⁄D-TOPO™ Cloning Kit는 매우 효율적인 5분 cloning 전략(TOPO™ Cloning)을 이용해 blunt-end PCR 생산물을 Gateway™ System or the MultiSite Gateway™ System에자세히 알아보기

pENTR™⁄D-TOPO™ Cloning Kit는 매우 효율적인 5분 cloning 전략(TOPO™ Cloning)을 이용해 blunt-end PCR 생산물을 Gateway™ System or the MultiSite Gateway™ System에 들어가는 vector로 직접적인 클로닝을 합니다. Blunt-end PCR 생산물은 ligase없이 90% 이상의 효율성으로 직접 post-PCR 절차나 필요한 restriction enzyme를 직접적인 클로닝을 합니다. 이 kit는 PCR amplification 유전자를 클로닝하고 선택하는데 필요한 모든 것을 제공합니다.

• Gateway™ 시스템 준비— 여러 vector system 간 cloned gene을 신속하게 운반함
• 빠르고 쉬움— 단 5분 내에 3단계로 PCR에서 Gateway™ Entry clone으로
• 효율적 — 올바른 방향으로 바르게 삽입하여 90% 이상 clone
• 입증된 성능 — 십여년 간 믿을 수 있는 성능

pENTR™ ⁄D-TOPO™ Cloning Kits 개요

#### VECTOR	pENTR™ ⁄D-TOPO™ Vector	Gateway System에 들어가는 Directional cloning vector
#### 클로닝 방법	직접적인 TOPO™ Cloning	Topoisomerase I 기반, 5분 이내에 blunt-end proofreading polymerase-amplified PCR 생산물을 vector로 직접적인 결합
#### COMPETENT CELLS	두 가지 옵션	높은 효율성 또는 빠른 성장율의 우수한 세포 kit 중 선택하세요.

간편한 Gateway™시스템 접근
Gateway™ System에 들어가려면 대상 유전자를 PCR 증폭하고 제공된 topoisomerase charged pENTR™⁄D-TOPO™ vector에 곧바로 추가한 후 5분 간 배양하고 제공된 해당 E. coli 세포에 넣으세요. 이렇게 만들어진 Gateway™ Entry clone 함유 attL을 이용해 선택한 Gateway™ Destination vector로 효율적인 재조합을 즉시 수행할 수 있습니다.

최적화된 pENTR™⁄D-TOPO™ Vector
pENTR™⁄D-TOPO™ vector (Figure 1)에는 M13 및 T7 primer sequencing site와 PCR 생산물 삽입 부위를 flanking하는 attL 재조합 부위가 있습니다. 이로 clone sequence를 쉽게 검증하고 선택한 attR containing Gateway™ destination vector에 재조합할 수 있습니다. Kanamycin 저항 유전자와 pUC origin이 E. coli 선택과 high-copy propagation에 이용됩니다.

단순화된 Directional cloning
Directional TOPO™ 클로닝 기법을 사용하면 PCR 세척, vector preparation이나 다른 시간이 많이 걸리는 DNA 조작 단계가 필요 없습니다. PCR 반응을 곧바로 제공된 topoisomerase charged vector에 추가하여 5분 간 배양시킨 후 transform하면 최대 90%의 직접 삽입된 클론을 얻을 수 있습니다. 이 vector에 있는 four base overhang이 PCR 반응에 사용되는 forward primer에 설계된 four base sequence와 짝을 이루어 topoisomerase ligation 반응에 방향성을 제공합니다(Figure 2).

Gateway™ Recombination Cloning 기술
Gateway™ Recombination Cloning 기술은 간접 클로닝의 한계를 피해 1시간 내에 99% 효율성과 가역성을 가진 Gateway™ recombination 반응에서 사실상 모든 expression system에 접근할 수 있습니다. restriction enzymes, ligase, subcloning 단계, 수많은 colony screening 또는 re-sequencing 없이 다른 vector 간 동일한 DNA sequence를 이동시키는 능력은 시간과 돈, 노력을 절감시켜 줍니다.

선도적인 Cloning 기술
cloning에서 TOPO™ cloning 기술과 Gateway™ Recombination Cloning 기술은 십여 년 간 수 천만명의 과학자들이 이용하고 있는 믿을 수 있는 기술입니다. 빠르고 사용이 간편하며 효율적인 TOPO™ 클로닝과 Gateway™ 재조합으로 클로닝과 다양한 Gateway™ expression vector 조합 간 gene transfer를 빠르게 할 수 있습니다.

Kit 옵션
pENTR™⁄D-TOPO™ Cloning Kit는 표준 클로닝용 TOP10 competent cell이나 빠른 성장율을 위한 Mach1™-T1R competent cell로 구매 가능합니다.

이 제품은 연구용으로만 사용가능합니다. 치료 또는 진단 목적으로 동물이나 인간에 사용할 수 없습니다.

사양

클로닝 방법Directional TOPO™

반응 수20 reactions

제품라인One Shot™

제품 유형TOPO Cloning Kit

수량20 Reactions

벡터pENTR

Unit SizeEach