Thermo Fisher Scientific aLICator LIC Cloning and Expression Kit 4 (N-terminal His-tag/WQ)

Thermo Scientific™ aLICator LIC Cloning and Expression Kit 4 (N-terminal His-tag/WQ)

Thermo Scientific™ aLICator™ LIC Cloning and Expression System은 E. coli_에서 빠르고 효율적인 ligation independent cloning(LIC)과 엄격한 유전자 발현 조절을 위해 설계된 시스템입니다. pLATE 세균 발현 벡터는 높은 수준의 목표 단백질 발현과 낮은 비유도(background) 발현을 제공하여 _E. coli 세포에 독성이 있는 단백질의 발현도 가능하게 합니다. 방향성 LIC 클로닝 기술을 사용하여 빠르고 효율적인 클로닝을 지원하며, 높은 클로닝 효율을 제공합니다.

엄격한 발현 조절과 신속하고 효율적인 방향성 클로닝 기능으로, aLICator LIC Cloning and Expression System은 일반적 및 독성 유전자의 클로닝과 발현에 최적의 선택입니다.

Highlights

• High efficiency LIC cloning
• Tight control of gene expression
• High yield expression
• Versatile—tagged or untagged protein expression with tag removal option

Applications

• Directional PCR product cloning
• Tightly regulated protein expression
• Expression of toxic genes

Principle

aLICator LIC 클로닝 시스템은 방향성 LIC 클로닝 기술을 이용해 발현 벡터로의 클로닝을 간소화하고 효율을 높입니다. LIC는 95% 이상의 높은 클로닝 효율을 보이며, ligation 및 제한효소 절단 단계를 제거합니다.
이 방법은 T4 DNA polymerase를 사용하여 pLATE 벡터와 DNA insert에 14–21 뉴클레오타이드의 single-stranded overhang을 생성합니다. T4 DNA polymerase의 3′→5′ exonuclease 및 5′→3′ polymerase 활성을 이용하며, 반응에는 dGTP만 포함되어 있어 특정 지점에서 반응이 멈춥니다. 이후 annealing된 벡터와 insert는 T4 DNA ligase 없이 E. coli 세포로 형질전환되며, 세포 내에서 공유 결합이 형성되어 완전한 플라스미드가 생성됩니다.

Features

이 시스템은 pLATE 시리즈 세균 발현 벡터를 기반으로 한 네 가지 키트로 구성됩니다.

• aLICator™ LIC Cloning and Expression Kit 1 – pLATE11 벡터, untagged 단백질 발현
• aLICator™ LIC Cloning and Expression Kit 2 (N-terminal His-tag/EK) – pLATE51 벡터, N-말단 His-tag 단백질 발현
• aLICator™ LIC Cloning and Expression Kit 3 (C-terminal His-tag) – pLATE31 벡터, C-말단 His-tag 단백질 발현
• aLICator™ LIC Cloning and Expression Kit 4 (N-terminal His-tag/WQ) – pLATE52 벡터, N-말단 His-tag 단백질 발현, WELQut 절단 기능 포함

단백질이 N- 또는 C-말단 6xHis-tag 위치에 대한 선호도가 알려진 경우 해당 키트를 사용하는 것이 권장됩니다. 단백질 구조나 특성이 명확하지 않은 경우, 세 가지 벡터 모두에 클로닝하여 최적의 벡터를 선택하는 것을 권장합니다.

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Specifications