Thermo Fisher Scientific Multi-Copy Pichia Expression Kit

Invitrogen™ Multi-Copy Pichia Expression Kit

Thermo Fisher Scientific의 Multi-Copy Pichia Expression Kit는 pPIC3.5K, pPIC9K, pAO815 벡터를 포함하여 관심 유전자의 다중 복제본을 보유한 Pichia 균주를 생산 및 선별할 수 있도록 설계된 키트입니다. 유전자 복제 수가 증가하면 발현 수준이 향상되는 경우가 많습니다.

pPIC9K 및 pPIC3.5K 벡터

• 두 벡터 모두 Pichia에서 Geneticin™ Reagent에 대한 내성을 부여하는 카나마이신 내성 유전자를 포함합니다.
• 높은 농도의 Geneticin™에서 성장 가능한 형질전환체는 다중 복제 유전자를 포함한 균주로 간주됩니다.
• pPIC9K는 분비형 단백질 발현을, pPIC3.5K는 세포 내 단백질 발현을 유도합니다.

pAO815 벡터

pAO815는 하나의 벡터 내에 관심 유전자의 다중 복제본을 클로닝할 수 있도록 설계된 Pichia 발현 벡터입니다.
벡터에는 5´ AOX1 유전자 상류의 Bgl II 부위와 3´ AOX1 전사 종료 신호 하류의 BamH I 부위가 포함되어 있습니다.

다중 복제본 생성 단계

1. 관심 유전자를 벡터의 EcoR I 부위에 클로닝합니다.
2. 생성된 구조물을 BamH I 및 Bgl II로 절단하여 발현 카세트(AOX1 프로모터, 유전자, 3´ AOX1 TT 포함)를 분리합니다.
3. 발현 카세트를 in vitro에서 연결하여 concatemer를 생성합니다.
4. 다중 복제본을 pAO815 벡터에 삽입하고 Pichia에 형질전환합니다.

이들 벡터는 개별적으로도 구매할 수 있습니다.

사양