Thermo Fisher Scientific GeneArt Chlamydomonas Protein Expression Vector

GeneArt™ Chlamydomonas Protein Expression Vector

Thermo Fisher Scientific Invitrogen™ GeneArt™ Chlamydomonas Protein Expression Vector는 녹조류 Chlamydomonas reinhardtii 137c의 핵 유전체에서 유전자 발현을 위한 2세대 단백질 발현 벡터입니다. 높은 수준의 발현을 위해 최적화되어 있으며, 유전자 침묵(gene silencing)을 억제하고, 단백질 검출 및 정제를 위한 이중 태그(6His-TEV 및 V5-His)를 제공합니다.

이 키트에는 발현 벡터와 간단한 프로토콜이 포함되어 있으며, 별도로 제공되는 Gibco™ TAP Media는 Chlamydomonas*의 성장과 유지에 최적화되어 있습니다. *Chlamydomonas reinhardtii 137c 균주는 Chlamydomonas Resource Center에서 구할 수 있습니다.

주요 특징

• 관심 유전자의 총 용해성 단백질 중 최대 1%까지 발현 가능
• 여러 계대배양에서도 유전자 침묵 억제 유지
• 6His-TEV 및/또는 V5-His 태그로 단백질 검출 및 정제 가능
• Seamless assembly 방식과 호환
• 높은 균주 생존율과 순도로 신뢰성 있는 결과 제공

Chlamydomonas pChlamy_4 Vector

핵 유래 발현은 엽록체 발현보다 번역 후 변형(post-translational modification), 단백질 타깃팅 및 분비 측면에서 이점을 제공합니다. 그러나 기존에는 발현 효율이 낮았으며, 이는 프로모터의 한계, 게놈 통합 위치 효과, 유전자 침묵 등 다양한 이유에 기인했습니다.

GeneArt™ Chlamydomonas Protein Expression Vector는 이러한 문제를 개선하여 상대적으로 높은 단백질 발현 수준과 침묵 억제를 제공합니다. 또한 pChlamy_4 벡터는 seamless cloning 방식과 호환되어 최종 컨스트럭트에 불필요한 염기서열이 추가되지 않습니다.

벡터 특징

• Hsp70A-RbcS2 프로모터: 내인성 구성적 프로모터로, Hsp70A 활성 인자와 두 개의 RBC S2 인트론 서열을 포함하여 발현 수준을 향상
• Hsp70A-RbcS2-ble 프로모터 융합: bleomycin/Zeocin™ 내성 유전자를 융합하여 여러 계대에서도 안정적인 발현 유지
• FMDV 2A 펩타이드 서열: 항생제 내성 유전자와 관심 유전자 간의 자가 절단을 유도하여 두 개의 독립된 단백질 생성
• 3′ UTR 서열: 전사 종결, 번역 효율 향상, mRNA 안정성 및 폴리아데닐화 신호 제공
• 이중 단백질 태그: 6His-TEV 및 V5-His epitope을 유전자 양단 또는 선택적으로 부착 가능

Selection Against Silencing

C. reinhardtii에서 자주 발생하는 전이유전자 침묵을 방지하기 위해, pChlamy_4 벡터는 bleomycin/Zeocin 내성 유전자(sh-ble)와 관심 유전자를 전사 융합 형태로 설계했습니다.
FMDV 2A 펩타이드(약 20 아미노산)는 두 단백질 간의 정확한 절단을 유도하여 두 개의 독립된 단백질을 생성합니다.
이 시스템을 통해, 선택 압력 유무에 관계없이 여러 계대배양 후에도 높은 발현 수준이 유지됨이 확인되었습니다.

MAX Efficiency Transformation Reagent for Algae

Chlamydomonas 연구의 주요 난제 중 하나는 강한 세포벽으로 인한 외래 DNA 도입의 어려움입니다.
이 벡터는 효율적인 형질전환을 위한 MAX Efficiency Transformation Reagent와 함께 사용하도록 설계되었습니다.

사양

제품 이미지