Thermo Fisher Scientific PKA (Protein Kinase A) Colorimetric Activity Kit, 96 Tests

Invitrogen™ PKA (Protein Kinase A) Colorimetric Activity Kit

제품 개요

PKA (Protein Kinase A) Colorimetric Activity Kit는 연구용으로 설계된 정량적 컬러리메트릭 활성 분석 키트로, 세포 용해물, 조직 추출물 및 완충액 시료 내의 PKA 활성을 검출 및 정량화할 수 있습니다.

이 키트는 완전한 구성품을 포함한 즉시 사용 가능한 형태로 제공되며, PKA 기질이 코팅된 96웰 플레이트, PKA 표준(5,000 U), 인산화 PKA 기질 항체 및 기타 분석에 필요한 시약이 포함되어 있습니다.
450 nm 및 650 nm에서 광학 밀도를 측정할 수 있는 마이크로플레이트 리더가 필요합니다.

성능 특성

• Assay type: Colorimetric activity kit
• Sample types: Cell lysates, tissue extracts, buffer samples
• Sensitivity: 0.037 U/mL
• Standard curve range: 0.625–10 U/mL
• Reactivity: Species independent

배경 정보

PKA는 Arg-directed kinase 또는 AGC-family kinase로 분류되는 중요한 단백질 키나아제 그룹의 일원으로, cAMP-dependent protein kinase (PKA), cGMP-dependent protein kinase (PKG), protein kinase C (PKC), Akt, RSK 등이 포함됩니다.
이들 키나아제는 인산화되는 세린 또는 트레오닌의 세 번째 위치에 아르기닌(Arg)을 갖는 기질 특이성을 공유합니다.

cAMP는 포유류 세포에서 PKA를 활성화시켜 유전자 전사, 이온 수송, 단백질 인산화 등 다양한 세포 내 기전을 조절합니다.
비활성 상태의 PKA는 조절 서브유닛(R) 이합체와 촉매 서브유닛(C) 이합체로 구성된 이종사량체로 존재하며, R 서브유닛의 가성기질 서열이 C 서브유닛의 활성 부위를 차단합니다.
PKA는 Akt(PKB) 및 PKC와 기질 특이성을 공유하며, Bad (Ser155), CREB (Ser133), GSK-3 등이 대표적인 기질입니다.

PKA는 세포 내 칼슘 농도 조절, 전사 인자 활성화 등 다양한 세포 과정에 관여하며, CREB, CREM, ATF1과 같은 전사 인자를 인산화하여 cAMP 반응 요소를 통한 전사 조절에 중요한 역할을 합니다.

분석 원리

이 키트는 다양한 시료 내 PKA 활성을 정량적으로 측정하도록 설계되었습니다.
재조합 PKA 표준이 제공되어 표준 곡선을 생성할 수 있으며, 모든 시료는 해당 표준 곡선을 기준으로 계산됩니다.
마이크로타이터 플레이트에 고정된 PKA 기질이 ATP 존재 하에서 시료 내 PKA에 의해 인산화됩니다.
90분간의 반응 후 세척 과정을 거치며, 인산화된 기질에 특이적인 항-PKA 항체가 결합합니다.
이후 HRP가 결합된 2차 항체를 처리하고, 발색 기질을 첨가하면 생성된 색의 강도는 시료 내 PKA 양에 비례합니다.

관련 링크

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제품 사양