Merck Human Whole Genome SAM CRISPRa Pooled Lentiviral Library Kit Puro

Human Whole Genome SAM CRISPRa Pooled Lentiviral Library Kit Puro

포장

• 40 바이알 구성 (5개 키트 구성품 각각에 대해 8×25 μL 분주)

적용 분야

• CRISPR 활성화 스크리닝

배송 상태

• 드라이아이스(dry ice)

저장 온도

• −70 °C

제품 설명

전사 활성화因자 VP64가 뉴클레아제 결손형 SpCas9(dCas9)과 융합되어 CRISPR 가이드 RNA(gRNA)와 함께 리보핵단백질 복합체(RNP)를 형성합니다. gRNA 스캐폴드의 stem 및 tetra-loop 서열은 최소 헤어핀 RNA 압타머로 변형되어, 이들이 이합체화된 MS2 박테리오파지 코트 단백질에 선택적으로 결합하도록 설계되었습니다.
MS2 코트 단백질은 NF-κB의 p65 서브유닛과 인간 열충격인자 1(HSF1)의 활성 도메인과 융합되어 있으며, 각 gRNA는 두 개의 압타머를 포함해 총 네 개의 공동활성 단백질을 유도할 수 있습니다.

dCas9-VP64, MS2-p65-HSF1 헬퍼 구조체 및 gRNA는 세 개의 별도 플라스미드/렌티바이러스 입자로 제공됩니다.
어레이 형식의 gRNA 라이브러리와 달리, 풀드 형식의 gRNA 라이브러리는 수천 개의 개별 gRNA를 단일 튜브에 포함하여 로보틱스나 특수 장비 없이 벤치탑 수준에서 전장 인간 유전체(16,000개 이상의 유전자)를 효율적으로 스크리닝할 수 있습니다.

SAM CRISPR 라이브러리는 3개의 서브풀(sub-pool)로 제공되며, 각 서브풀은 약 23,500개의 gRNA(RefSeq ID당 3개 gRNA)를 포함합니다. 전체 유전체 라이브러리는 약 70,000개의 gRNA로 구성되며, 총 19,000개의 고유 유전자 심볼(대체 아이소폼 포함 23,500 RefSeq ID)을 타깃합니다.

각 풀에는 100개의 비표적(negative) gRNA가 포함되어 있으며, 이는 딥시퀀싱을 통한 gRNA 빈도 변화의 통계적 특성화 시 기준선으로 사용됩니다. 비표적 gRNA는 목표 유전체와의 상동성이 거의 없어 대조군 처리 동안 표현 비율의 유의한 변화를 일으키지 않습니다.
CRISPR 활성화 스크리닝 실험의 특성상, 양성 대조군은 스크리닝하려는 특정 표현형에 따라 실험적으로 결정해야 합니다. 이러한 대조군 구성은 실험 설계 및 후속 데이터 분석 시 다양한 옵션을 제공합니다.

제품 사양