Exo-i

다중 칼럼크로마토그래피 기술을 응용한 고순도 엑소좀 분리키트

1등급 의료기기(기타전처리일체형시약)으로 신고되어 혈액에서 엑소좀을 분리할 수 있습니다.
엑소퍼트의 Exo-i 키트는 화학적/물리적 변형없이 혈액 내 수용성단백질과 지질단백질을 효과적으로 제거할 수 있어 후속 연구에 활용하기 적합합니다.

Why Exo-i

기술원리

다중층 크기배제 크로마토그래피

Exo-i는 칼럼 내부에 채워진 두개층의 다공성 비드를 통해 엑소좀을 분리할 수 있습니다.
각각의 비드는 서로 다른 공극을 가지고 있으며 복합적인 크기 배제를 통해 엑소좀 분획을 획득하는 것을 넘어
혈장 분석에서 간섭을 일으키는 지질단백질 및 수용성 단백질을 효과적으로 제거할 수 있습니다.
(관련 논문: Scientific reports 11.1 (2021): 1-9.)

Exo-i를 이용하는 방법은 매우 단순합니다.

• 칼럼에 PBS를 흘려주고 분리를 준비합니다.
• 생체샘플(세포배양액, 혈장, 혈청 등) 500 ㎕를 로딩합니다
• 물방울이 떨어지지 않으면 PBS를 추가합니다.
• 분획을 500 ㎕ 씩 포집합니다.

▶ Exo-i manual

성능결과

엑소좀 관련 단백질 발현량 확인

웨스턴 블롯 결과는 a) 폐암 세포 배양액과 b) 사람 혈장에서 EV 관련 marker 단백질을 보여줍니다.
a)의 결과는 자사의 column이 보편적으로 사용되는 2B column과 비교하여 효과적으로 비엑소좀 관련 단백질들을 제거하고 엑소좀 관련 단백질의 양을 보존한다는 것을 보여주며, b)의 결과는 자사 칼럼을 이용한 엑소좀 분획 별 엑소좀 관련 단백질(CD9, CD63, CD81, Alix, Annexin V, Annexin A1, Flotillin-a, TSG101)의 발현을 보여줍니다. 해당 단백질들은 MISEV2018가이드라인을 따라 결정되었습니다.

혈장속의 지질단백질과 수용성단백질의 제거

Exo-i 칼럼을 사용하여 혈장의 엑소좀을 분리한 후 효소결합면역흡착검사(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)를 진행한 결과입니다. 각각의 제거율은 지질단백질(Apolipoprotein) 91.37%, 수용성단백질(Albumin) 90.96%로 나타났습니다. 엑소좀 이외의 물질을 높은 비율로 제거함으로써, 높은 순도를 유지할 수 있습니다.

크기, 수득률, 순도

왼쪽 결과는 Nanoparticle tracking analysis (Nanosight)와 Small Protein의 농도분포를 통해 혈장분획물(Fraction)내의 엑소좀의 크기 분포와 수득률을 보여줍니다. 위 그래프는 분획에 따라 Vesicle의 크기가 점진적으로 감소함을 보여줍니다. 11번 분획과 12번 분획의 가장 많은 수의 Vesicle의 크기는 100~150nm로 알려진 엑소좀의 크기 범위에 포함됩니다. 밑의 그래프는 Vesicle 모양의 입자 (검은색)과 Small Protein(빨간색)의 농도분포를 보여줍니다. 이 결과는 우리의 칼럼을 통한 엑소좀 분획이 무세포단백질의 오염을 최대한 피할 수 있다는 것을 보여줍니다.

논문 및 관련 문서

Many papers have been published using our technology.

1. "Early-stage lung cancer diagnosis by deep learning-based spectroscopic analysis of circulating exosomes."

ACS nano 14.5 (2020): 5435-5444.

2. "A Proteomic Approach to Understand the Clinical Significance of Acute Myeloid Leukemia–Derived Extracellular Vesicles Reflecting Essential Characteristics of Leukemia."

Molecular & Cellular Proteomics 20 (2021).

3. "Dual size-exclusion chromatography for efficient isolation of extracellular vesicles from bone marrow derived human plasma."

Scientific reports 11.1 (2021): 1-9.

4. "GCC2 as a New Early Diagnostic Biomarker for Non-Small Cell Lung Cancer."

Cancers 13.21 (2021): 5482.