Thermo Fisher Scientific pEXP4-DEST Vector Kit

Invitrogen™ pEXP4-DEST Vector Kit

Expressway™ Tag-On-Demand™ Cell-Free E. coli Expression System with Lumio™ Technology는 단일 벡터에서 태그 유무에 따른 단백질을 in vitro에서 편리하게 발현할 수 있도록 지원합니다. 이 시스템은 단백질 합성의 실시간 검출 및 젤 상에서의 단백질 검출을 용이하게 합니다.

주요 특징

• 전체 길이 단백질의 발현 수준을 빠르게 스크리닝 가능
• 한 번의 클로닝으로 태그 단백질 또는 네이티브 단백질 발현 가능
• Ultimate™ ORF Clone으로부터 C-말단 태그 단백질을 in vitro 시스템에서 발현 가능

시스템 구성 및 원리

Expressway™ Tag-On-Demand™ System은 sl_yD 돌연변이 E. coli 유래의 특수한 라이세이트를 포함하여, Lumio™ Green Detection Reagent의 비특이적 결합을 제거하고 재조합 단백질 검출을 위한 최적의 배경을 제공합니다.

작동 원리

관심 유전자를 TAG(amber) 종결 코돈을 포함한 형태로 제공된 pEXP4-DEST 벡터에 클로닝합니다.
pEXP4-DEST 벡터는 효율적인 Gateway™ 재조합을 위한 attR 부위, C-말단 Lumio™ 및 6xHis 태그, 그리고 무세포 단백질 합성을 위한 구성 요소를 포함합니다.
Expressway™ Tag-On-Demand™ Suppressor tRNA 존재 시 TAG 코돈이 인식되지 않아 Lumio™ 및 6xHis 태그까지 번역이 지속됩니다. Suppressor tRNA 부재 시 TAG 코돈이 종결 신호로 인식되어 네이티브 단백질이 생성됩니다.
이를 통해 동일한 벡터에서 C-말단 태그 단백질 발현 및 네이티브 단백질 발현을 빠르게 비교할 수 있습니다.

사양