Thermo Fisher Scientific 5(6)-SFX (6-(Fluorescein-5-(and-6)-Carboxamido) Hexanoic Acid, Succinimidyl Ester), mixed isomers

Invitrogen™ 5(6)-SFX (6-(Fluorescein-5-(and-6)-Carboxamido) Hexanoic Acid, Succinimidyl Ester), Mixed Isomers

Fluorescein은 녹색 형광 유도체화 시약으로 널리 사용되며, Succinimidyl Ester는 단백질, 아민 변형 올리고뉴클레오타이드 및 기타 아민 함유 분자의 1차 아민(R-NH₂) 표지에 자주 사용됩니다.
이 SFX Succinimidyl Ester는 형광체와 반응성 그룹 사이에 7개의 원자로 이루어진 아미노헥사노일 스페이서를 포함하고 있어, 결합 시 형광 소광(quenching)을 줄이는 데 도움이 됩니다.
결합된 형광체는 표준 FITC 또는 GFP 필터 세트로 검출이 가능하며, Fluorescein 기반 염료는 광표백률이 높고 pH에 민감합니다.
대안으로 Alexa Fluor™ 488과 Oregon Green™ 488은 Fluorescein과 유사한 스펙트럼을 가지며, 광안정성이 높고 생리적 pH 범위에서 pH 민감도가 낮습니다.

Specifications

Typical Conjugation Reaction

아민 반응성 시약은 대부분의 단백질이나 펩타이드와 결합할 수 있으며, 제공된 프로토콜은 IgG 항체에 최적화되어 있습니다.
단백질 농도는 최소 2 mg/mL 이상이 권장되며, 세 가지 다른 몰 비율을 사용하여 라벨링 정도를 조정할 수 있습니다.

형광 Succinimidyl Ester는 일반적으로 고순도 무수 DMF 또는 DMSO에 용해시키며, 0.1–0.2 M sodium bicarbonate buffer (pH 8.3)에서 실온에서 1시간 반응시킵니다.
말단 아민의 pKa가 Lysine ε-아미노기보다 낮기 때문에, 중성에 가까운 pH 버퍼를 사용하면 말단 아민의 선택적 라벨링이 가능합니다.

Conjugate Purification

라벨링된 항체는 일반적으로 Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 등의 겔 여과 칼럼을 이용해 자유 염료로부터 분리합니다.
단백질 크기에 따라 적절한 분자량 컷오프를 가진 겔 여과 매체를 선택하거나, 투석법으로 정제할 수도 있습니다.

Alternative Packagings

혼합 이성질체 아민 반응성 Succinimidyl Ester 형광체는 다음과 같은 다양한 포장으로도 제공됩니다.

• 10 × 1 mg 단위 (Cat. No. F6129)
• 단일 이성질체 (Cat. No. F6106)
• 보다 친수성인 스페이서를 포함한 제품 (Cat. No. F6130)
• 단백질 및 핵산 라벨링용 다양한 키트 형태 (Active esters and kits for labeling proteins and nucleic acids—Table 1.2)