SCbio™ LuminaGlo Chemiluminescent Substrate / 200mL(Solution A: 100mL, Solution B: 100mL)

제품 소개

SCbio™ LuminaGlo Chemiluminescent Substrate는 HRP(Horseradish Peroxidase) 기반 ECL 반응을 이용하여 단백질을 고감도로 검출하는 Western blot detection reagent입니다.

LuminaGlo Substrate 시리즈는 실험 목적과 검출 감도에 따라 다음 제품군 중 선택할 수 있습니다.

• LuminaGlo
• PICOPLUS
• PREMIUM
• FEMTO

제품 정보

핵심 기능 및 특징

• 나노그램에서 펨토그램 수준의 단백질까지 검출 가능
• 1분 이내의 빠른 반응 시간
• 낮은 배경 잡음과 선명한 발광 신호 제공
• Western blot에서 HRP-conjugated antibody를 이용한 고감도 단백질 검출에 사용
• 실험 목적과 단백질 발현 수준에 따라 LuminaGlo, PICOPLUS, PREMIUM, FEMTO 제품군 선택 가능

권장 사용 방법

1. Solution A와 Solution B를 사용 직전에 1:1로 혼합합니다.
2. 혼합액을 Pipette으로 Membrane 위에 소량 도포하여 얇게 코팅합니다.
3. 약 1분간 반응시킨 후 즉시 Imaging을 수행합니다.
4. 혼합액을 미리 제조하면 활성이 저하될 수 있으므로 사용 직전에 혼합합니다.

Background가 강한 경우

혼합된 Substrate를 DW 또는 TBS로 1:2~1:5 희석하여 사용하면 보다 깨끗한 밴드를 얻을 수 있습니다.

Western blot 결과별 빠른 자가 진단

Detailed Troubleshooting

Signal이 없거나 약한 경우

• 단백질 Transfer 확인: Ponceau S staining(Cat. No. 502B2979)으로 Membrane transfer 여부를 먼저 확인합니다.
• Primary antibody 조건 확인: 1차 항체 농도와 incubation 조건을 재확인합니다.
• HRP-conjugated Secondary antibody 확인: HRP-conjugated 항체를 사용했는지 확인합니다.
• Substrate A/B 혼합 확인: 사용 직전에 A/B 용액을 1:1로 혼합합니다. 미리 혼합하면 활성이 저하될 수 있습니다.
• Sample loading 양 증가: 단백질 발현량이 부족하거나 낮은 경우 loading 양을 늘립니다.
• Primary antibody 농도 증가: 항체 농도를 높이거나 incubation 시간을 연장합니다.
• 고감도 제품으로 업그레이드: LuminaGlo에서 PICOPLUS 또는 FEMTO로 변경하여 더 높은 감도를 활용합니다.

Background가 높은 경우

• 충분한 Blocking 수행: 5% Skim milk 또는 BSA로 충분히 Blocking합니다.
• Antibody dilution 증가: Primary 또는 Secondary antibody 농도가 높으면 background가 증가할 수 있습니다.
• TBST Washing 횟수 증가: 10X TBS Buffer(Cat. No. 502B2839)를 사용하여 washing 횟수를 늘립니다.
• Membrane 오염 방지: 깨끗한 forceps를 사용하고 Membrane 취급 시 오염을 방지합니다.
• Substrate 희석 사용: 혼합된 Substrate를 DW 또는 TBS로 1:2~1:5 희석하여 사용할 수 있습니다.

Band smearing 또는 Signal saturation이 발생하는 경우

• Protease inhibitor 사용: EZStop Protease Inhibitor Cocktail(Cat. No. 502S4514)을 처리합니다.
• Sample loading 양 감소: 과량 Loading은 Band smearing의 주요 원인입니다.
• Transfer 조건 조정: Transfer voltage와 시간을 재확인합니다.
• Antibody dilution 증가: 항체 농도가 과다하면 Signal saturation과 High membrane background가 동시에 발생할 수 있습니다.
• Imaging Exposure 시간 감소: Signal saturation이 발생하면 Exposure 시간을 줄입니다.
• Substrate 사용량 감소: Membrane 전체가 어두울 경우 Substrate 사용량을 줄입니다.

실험 전 확인 사항

• Ponceau S staining으로 단백질 Transfer를 먼저 확인합니다.
• Primary 및 Secondary antibody의 농도와 희석 조건을 최적화합니다.
• 항체 반응 후 TBST washing을 충분히 수행합니다. 권장 조건은 5분씩 3~5회입니다.
• LuminaGlo Substrate는 사용 직전에 A액과 B액을 1:1로 혼합합니다.
• 극미량 단백질 검출에는 LuminaGlo FEMTO를 사용할 수 있습니다.
• FEMTO 사용 시 Substrate를 소량 도포하고 약 1분 후 즉시 Imaging을 수행합니다.

제품군 선택 가이드

SCbio™ LuminaGlo Chemiluminescent Substrate 시리즈는 실험 목적과 단백질 발현 수준에 따라 LuminaGlo, PICOPLUS, PREMIUM, FEMTO 중 선택할 수 있습니다. 실험 조건 최적화나 제품 선택에 대한 문의가 필요한 경우 공급사에 문의하시기 바랍니다.

출처

• LuminaGlo Chemiluminescent Substrate
• SCbio™ LuminaGlo Chemiluminescent Substrate Series

제품 이미지

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