Thermo Fisher Scientific pTZ19R DNA

Thermo Scientific™ pTZ19R DNA

Thermo Scientific pTZ19R/U는 2862 bp 길이의 소형 파지미드(phagemid)로, 파지 f1의 인터제닉 영역(intergenic region, IG)을 pUC19에 삽입하고 T7 프로모터 서열을 MCS 근처에 추가하여 제작되었습니다. pTZ19R과 pTZ19U는 삽입된 f1 IG 영역의 방향이 다릅니다.
이 파지미드는 DNA 클로닝, 디디옥시 시퀀싱, in vitro 돌연변이 유도 및 in vitro 전사에 사용됩니다.
도움 파지(helper phage) M13K07로 초감염(superinfection) 시 단일가닥 DNA를 생성할 수 있습니다.

주요 특징 (Highlights)

• E. coli (dam+, dcm+)에서 분리
• 90% 이상이 초나선(supercoiled) 형태
• E. coli (dam+, dcm–)에서도 분리 가능
• DNA 서열 분석 및 맵 생성은 REviewer 온라인 도구에서 확인 가능

응용 분야 (Applications)

• 클로닝 (Cloning)
• 삽입 DNA 시퀀싱
• In vitro 전사

pTZ19R 구성 및 사용 참고사항

pTZ19R/U 파지미드는 다음 구성 요소를 포함합니다.

• pMB1 복제원(rep): 파지미드 복제를 담당 (출처: pUC19)
• bla 유전자: 암피실린 내성을 부여하는 베타-락타마제 코드 (출처: pUC19)
• lac 오페론 영역: CAP 결합 부위, Plac 프로모터, lac 억제자 결합 부위, lacZ 유전자의 N-말단 조각 포함 (출처: pUC19)
  → pUC18/19와 동일한 방식으로 블루/화이트 스크리닝 가능
• T7 프로모터: MCS 근처에 삽입되어 in vitro RNA 합성 가능
• 파지 f1 IG 영역: (+) 및 (–) 가닥 DNA 합성 개시 및 종결, 파지 입자 내 포장에 필요한 서열 포함

DNA 복제 및 전사 메커니즘

단일가닥(+) DNA 합성에는 파지 유래 단백질 II, X, V가 필요하며, ori(+)에서 시작되어 지정된 방향으로 진행됩니다.
(+) DNA를 이중가닥으로 전환하는 과정에는 파지 유전자가 필요하지 않습니다.
DNA 합성은 숙주 RNA 중합효소가 합성하는 30뉴클레오타이드 RNA 프라이머에 의해 ori(–)에서 개시됩니다.

유전 요소 및 절단 효소 정보

pTZ19R DNA를 한 번 절단하는 효소의 위치가 지도에 표시되어 있으며, Thermo Scientific에서 생산하는 효소는 주황색으로 표시됩니다.
좌표는 각 인식서열의 첫 번째 뉴클레오타이드 위치를 나타냅니다.

• bla 유전자: 2732–2664 (상보가닥)
• LacZ 폴리펩타이드: 458 위치에서 종료 (상보가닥)
• rep 영역: 복제 개시점(1112 ±1)에서 복제 시작

pMB1 및 ColE1 복제원을 가진 플라스미드는 서로 비호환성이지만, p15A 복제원(pACYC177, pACYC184)을 가진 플라스미드와는 호환됩니다.
pMB1 유래 플라스미드는 클로람페니콜을 사용해 증폭할 수 있습니다.

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